外源性绵羊肺腺瘤病毒NM株的基因克隆及序列分析

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为了扩增外源性绵羊肺腺瘤病毒NM株基因序列,参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒(AF105220)的基因序列,设计合成5对引物,从自然感染绵羊肺腺瘤病毒的肺脏组织中提取总RNA,以RNA为模板,应用RT-PCR技术分别对exJSRV-NM株基因进行扩增,产物分别为5个(442bp,1124bp,2796bp,2054bp,535bp)特异性基因片段,将其分别克隆入pMD19-T载体中进行双向测序并用DNAstar软件进行序列序列分析,获得各段exJSRV-NM株基因序列。结果表明,pro基因含有930个核苷酸,编码290个氨基酸;pol基因含有2628个核苷酸,编码873个氨基酸,env基因含有1848个核苷酸,编码615个氨基酸。其中在pol基因的3’末端还重叠一个额外的开放阅读框(orf-x)。基因两端分别存在一个长末端重复区(LTR),LTR-5长443bp,LTR-3长为537bp。exJSRV-NM株基因组在pol基因的3’末端重叠一个额外的开放阅读框(orf-x)。在env基因编码的TM区发现外源性exJSRV特异性的“YXXM”基序,位于env基因编码氨基酸序列的第590到593位上。这是具有致病性外源性exJSRV的特有序列,说明JSRV-NM是具有致病力的毒株。exJSRV-NM各段基因分别与国外已报道的外源性exJSRV进行同源性比较,并绘制进化树来估计它们的系统进化关系。通过遗传进化树发现我国分离株与外源性美国代表株(AF105220)具有比较近的亲源关系。应用生物信息学分析技术并对exJSRV-NM株pro、pol和env基因所编码的蛋白分别进行蛋白结构预测,均为亲水蛋白。这是我国首次应用RT-PCR技术扩增出外源性JSRV基因,并为我国科研工作者进行更深入的研究奠定基础。
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