猫棒束孢菌丝粉免疫活性及其化学成分研究

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冬虫夏草(Cordyceps Sinensis)是冬虫夏草菌和蝙蝠蛾科幼虫的复合体,为传统三大名贵补益药材之一。冬虫夏草具有增强免疫力、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。但因药源紧缺昂贵,人们对冬虫夏草中分离的菌种经发酵得到的菌丝体开展了大量的研究。猫棒束孢(Isaria felina,IF)作为从天然冬虫夏草虫草体中分离得到的一株新的真菌,具有较好的药用前景。为此,本工作对猫棒束孢菌丝粉及其分离所得多糖进行了免疫调节功能的研究;并利用高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱(high performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS)对猫棒束孢菌丝粉的醇溶性主要化学成分进行了结构鉴定。具体研究内容及结果如下:(1)猫棒束孢菌丝粉的免疫活性研究探讨猫棒束孢菌丝粉(Isaria felina mycelium powder,IFMP)对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响。将昆明小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(香菇多糖,200 mg·kg-1)、IFMP低、中、高剂量组(100、200、400 mg·kg-1),除空白对照组外,其余5组通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫低下小鼠模型,每日灌胃给药一次,共给药10d,给药结束后,检测小鼠体质量增长值、肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数、血常规指标;碳廓清法和迟发型变态反应(Delayed type hypersensitivity,DTH)测定小鼠非特异性免疫功能和细胞免疫功能;双抗体夹心ELISA法测定小鼠血清中TNF-α水平。结果表明:与空白对照组比较,模型对照组小鼠各检测指标均显著降低(P<0.05)。与模型对照组比较,IFMP各剂量组小鼠的脾脏指数,白细胞、红细胞、血小板等血常规指标,吞噬指数α,足跖厚度差,TNF-α水平均显著升高(P<0.05)。综上,IFMP对环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠具有免疫保护作用。(2)猫棒束孢菌丝粉多糖的提取及其免疫活性研究采用水提醇沉法提取猫棒束孢菌丝粉多糖(Isaria felina mycelium powder polysaccharide,IFMPP),通过检测小鼠体质量增长值、脏器指数、血常规指标、血清中溶菌酶、IL-2、TNF-α、IgG的含量,从而观察IFMPP的免疫调节作用,并将IFMPP与IFMP二者的中剂量组效果进行比较。结果表明:IFMPP可使免疫抑制小鼠脾脏指数、胸腺指数、血常规指标及溶菌酶、IL-2、TNF-α、IgG含量均不同程度显著升高(P<0.05),且IFMPP中剂量组与IFMP中剂量组相比,IFMPP中剂量组效果较好。总之,IFMPP对环磷酰胺所致免疫低下模型小鼠的免疫功能有促进作用。(3)猫棒束孢菌丝粉主要化学成分的结构鉴定本工作在优化高效液相色谱分离猫棒束孢菌丝粉醇提物条件的基础上,采用HPLC-Q-TOF-MS联用法对猫棒束孢菌丝粉醇提物进行了测定,并通过正、负离子扫描模式进行数据采集,利用质谱工作站中查找、识别化合物等功能,结合数据库以及文献资料中二级碎片裂解规律提供的化合物信息,共鉴定出36种化合物,其中:核苷类(18种)、氨基酸类(15种)、甾醇类(1种)和糖苷类(2种)。其结果为猫棒束孢菌丝粉的基础研究、质量评价、活性成分筛选提供了科学依据,并为其开发利用奠定了基础。
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