【摘 要】
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背景:银屑病皮损的炎症环境是引起银屑病病理改变的基础,理论上公认IL-17A与TNF-α是引起银屑病病理改变的重要的炎症介质。然而基于临床样本的研究,较多文献认为IL-24也在银屑病的发生发展中产生重要的作用。为此,很多银屑病研究的学者认为银屑病的病理改变是由多种炎症因子之间存在的相互协调作用所致,而不是简单线性相加作用。为了解“IL-24”如何对银屑病的病理改变产生影响的问题,以及“IL-24”
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背景:银屑病皮损的炎症环境是引起银屑病病理改变的基础,理论上公认IL-17A与TNF-α是引起银屑病病理改变的重要的炎症介质。然而基于临床样本的研究,较多文献认为IL-24也在银屑病的发生发展中产生重要的作用。为此,很多银屑病研究的学者认为银屑病的病理改变是由多种炎症因子之间存在的相互协调作用所致,而不是简单线性相加作用。为了解“IL-24”如何对银屑病的病理改变产生影响的问题,以及“IL-24”与“IL-17A+TNF-α”之间对银屑病的病理改变是否存在相互依赖的协同作用的问题。本研究以HaCaT模型进行干预观察:即IL-24在有与无“IL-17A+TNF-α”的背景下对HaCaT的病理参数（K17及Ki67）是否产生影响?当然,我们深知细胞模型的研究结果与真实的银屑病病理基础有一定差距,但是,细胞模型研究结果有可能启发我们更好地了解真实的银屑病病理发生的基础。目的:探讨IL-24在IL-17A+TNF-α背景下对HaCaT细胞角蛋白17表达及其增殖活性的影响。方法:（1）检测银屑病组织中IL-24、K17、Ki67的表达。收集15例于武汉市同济医院皮肤科门诊就诊的寻常型银屑病患者躯干或四肢进行期和静止期皮损及15例于武汉市同济医院整形外科手术的健康者的躯干或四肢正常皮肤组织。应用免疫组织化学技术检测寻常型银屑病及正常人皮肤组织中IL-24、K17、Ki67的表达情况,并进行IL-24、K17与Ki67（增殖指标）之间的相关性分析。（2）使用RT-q PCR及Western Blot技术,分别将含0ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、100ng/ml IL-24的培养基用于培养HaCaT细胞48h后检测K17的m RNA及蛋白表达水平。其中0ng/ml IL-24培养的HaCaT细胞为正常对照组。（3）通过RT-q PCR及Western Blot实验技术,分别用含100ng/ml IL-24（A组/研究组1）、50ng/ml IL-17A+100ng/ml TNF-α（B组/共识的银屑病炎症环境组）、100ng/ml IL-24+50ng/ml IL-17A+100ng/ml TNF-α（C组/研究组2）的培养基培养HaCaT细胞48h后检测K17的m RNA及蛋白表达水平。（4）通过CCK8实验技术,分别用含A组、B组、C组（分组同前）的培养基培养HaCaT细胞24h、48h、72h后,用OD450值评估细胞增殖活性。结果:（1）免疫组化结果示:与健康者皮肤组织相比,银屑病患者皮损处的IL-24、K17、Ki67表达水平均明显升高。IL-24、K17与Ki67之间的相关性分析:IL-24与Ki67、K17与Ki67及IL-24与K17均呈正相关,即IL-24、K17表达越高,角质形成细胞增殖活性越强。（2）RT-q PCR及Western Blot结果表明:与正常对照组相比,用含10ng/ml及25ng/ml IL-24培养基的培养组K17 m RNA及蛋白表达无明显差异,用含100ng/ml IL-24培养基的培养组K17 m RNA及蛋白表达未升高。（3）RT-q PCR及Western Blot结果表明:与正常对照组相比,A组K17m RNA及蛋白表达未升高,B组K17 m RNA表达升高,B组K17蛋白表达未升高,C组K17 m RNA及蛋白表达均明显升高。（4）CCK8结果显示:与正常对照组相比,用A组培养基培养HaCaT细胞48h、72h后,OD450值未升高,用B组培养基培养HaCaT细胞48h、72h后,OD450值升高,用C组培养基培养HaCaT细胞48h和72h后,OD450值明显升高。结论:单独用IL-24刺激HaCaT细胞不能上调角蛋白17的表达,但IL-24在IL-17A+TNF-α背景下能明显促进HaCaT细胞角蛋白17表达,并使HaCaT细胞增殖活性增强。
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