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本研究使用DNAStar软件对Genebank中公布的AIV的M片段和NDV的F片段的基因序列进行同源性分析，设计出两对特异性引物。一对是禽流感病毒的通用引物，扩增片段大约为300bp；另一对是新城疫病毒的通用引物，扩增片段大约为200bp。在此基础上，建立了AIV、NDV的单项RT-PCR检测方法，用琼脂糖电泳鉴定PCR产物，结果证明所扩增产物的片段大小与目的片段的大小相符。在单项RT-PCR方法的基础上，建立了AIV和NDV的二联RT-PCR检测方法，可以在一个PCR反应中同时扩增出AIV和NDV中大小不同的两个特异性片段，并对引物浓度、退火温度等反应条件进行了优化。用该二联RT-PCR方法对AIV和NDV人工混合感染的鸡胚尿囊液、临床样品进行检测，与病毒分离法进行比较，特异性试验以传染性支气管炎病毒(IBV)和减蛋综合症病毒(EDSV-76)作为阴性对照。
成功建立了禽流感、新城疫二联RT-PCR检测方法。应用本方法检测样品AIV、NDV的RT-PCR全部阳性，非特异性对照样品经RT-PCR检测全部阴性。同时应用本方法和病毒分离法对30份人工感染尿囊液样品进行检测，RT-PCR检出23份阳性，病毒分离出24份阳性；对10份棉拭和组织脏器样品进行检测，RT-PCR检出8份阳性，病毒分离出9份阳性。分别提取AIV和NDV的RNA后，将病毒核酸连续作10倍的倍比稀释，单-RT-PCR方法最低可检出10<-5>稀释(约1pg)的AIV病毒核酸和10<-4>稀释(约3pg)的NDV病毒核酸；二联RT-PCR方法最低可同时检出10<-4>稀释AIV(约9pg)和NDV(约3pg)的病毒核酸。结果表明此二联RT-PCR检测方法的敏感性接近于病毒分离方法。与禽流感、新城疫荧光PCR检测试剂盒进行敏感性的对比试验结果表N-者的检测敏感性基本相当。因此，本研究建立的二联RT-PCR检测方法以其较好的特异性和敏感性，较短的检测时间(约7个小时)，在禽流感和新城疫的早期诊断、流行病学调查和疫情监测等方面具有很好的应用价值。