【摘 要】
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亚甲蓝光病毒灭活血浆用于临床输注多年,是我国获准用于临床输注的一种病毒灭活血浆制品。免疫介导的反应是输注血浆最常见的不良反应。亚甲蓝光病毒灭活血浆中残余亚甲蓝远低于临床引起不良反应的剂量。现有的文献表明,在低至病毒灭活血浆残余亚甲蓝浓度下,亚甲蓝对免疫细胞无明显影响。T细胞是适应性免疫反应中最主要的细胞。新生儿免疫功能发育不完全,T细胞与成人有所差异。本实验拟研究不同浓度、剂量下亚甲蓝对7日龄小鼠
【基金项目】
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深圳市科技计划项目（编号JCYJ20190814110401673）；
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亚甲蓝光病毒灭活血浆用于临床输注多年,是我国获准用于临床输注的一种病毒灭活血浆制品。免疫介导的反应是输注血浆最常见的不良反应。亚甲蓝光病毒灭活血浆中残余亚甲蓝远低于临床引起不良反应的剂量。现有的文献表明,在低至病毒灭活血浆残余亚甲蓝浓度下,亚甲蓝对免疫细胞无明显影响。T细胞是适应性免疫反应中最主要的细胞。新生儿免疫功能发育不完全,T细胞与成人有所差异。本实验拟研究不同浓度、剂量下亚甲蓝对7日龄小鼠T细胞免疫功能的影响,为新生儿输注亚甲蓝光病毒灭活血浆以及亚甲蓝作为临床治疗的安全性提供一定的理论依据。第一章不同浓度亚甲蓝对新生小鼠脾脏T细胞免疫功能的影响目的:探讨不同浓度亚甲蓝对7日龄小鼠脾脏T细胞增殖、CD3+CD4+-/CD3+CD8+亚群、分泌细胞因子IFN-γ、IL-10的影响,为新生儿输注亚甲蓝光病毒灭活血浆以及亚甲蓝作为临床治疗的安全性提供一定的理论依据。方法:在抗CD3ε/CD28抗体、IL-2的存在下,不同浓度亚甲蓝与7日龄BALB/c小鼠脾脏单个核细胞培养72h后,流式细胞术检测CFSE-CD3+T细胞的增殖、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值,以及ELISA定量检测IFN-γ、IL-10。结果和结论:亚甲蓝浓度≦ 0.63μmol/L时,对7日龄小鼠脾脏T细胞的增殖以及单个核细胞分泌IFN-γ、IL-10的功能无影响;≧1.25μmol/L时,浓度依赖性抑制7日龄小鼠脾脏T细胞的增殖以及单个核细胞分泌IFN-y、IL-10的功能。亚甲蓝浓度≦0.31μmol/L时,对7日龄小鼠脾脏T细胞CD3+CD4+/CD3+CD8+比值无影响;0.63-1.25μmol/L时,7日龄小鼠脾脏T细胞CD3+CD4+/CD3+CD8+比值呈浓度依赖性升高。第二章不同剂量亚甲蓝对新生小鼠脾脏T细胞分化的影响目的:探讨不同剂量亚甲蓝对7日龄小鼠脾脏CD3+T细胞/有核细胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值的影响,进一步为新生儿输注亚甲蓝光病毒灭活血浆以及亚甲蓝作为临床治疗的安全性提供一定的理论依据。方法:25只7日龄BALB/c小鼠随机分为5组:A组（未处理）、B组（生理盐水）、C组（亚甲蓝/小鼠体重1Omg/kg）、D组（亚甲蓝/小鼠体重20mg/kg）、E组（亚甲蓝/小鼠体重40mg/kg）,0.01mL生理盐水或亚甲蓝溶液/小鼠体重（g）腹腔给药72h后,流式细胞术检测脾脏CD3+T细胞/有核细胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值。结果和结论:未处理组与生理盐水组相比,脾脏CD3+T细胞/有核细胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值无差异;以10、20mg/kg亚甲蓝/体重腹腔给药与生理盐水组相比,脾脏CD3+T细胞/有核细胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值无差异;以40mg/kg亚甲蓝/体重腹腔给药与生理盐水组相比,脾脏CD3+CD4+/CD3+CD8+比值有显著差异,而CD3+T细胞/有核细胞比值无差异。
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