复黄片为上海中医药大学附属龙华医院协定处方,处方源于临床,主要用于痔疮等相关疾病的治疗。在临床上使用多年,疗效明确且未出现不良反应。为扩大适用范围、服务更多患者,研究人员前期在中医药理论指导下,按照中药6类新药要求完成了复黄片的临床前研究申报工作并获得临床批件。复黄片临床前研究建立了大黄的薄层色谱鉴别方案,方法灵敏度高且专属性良好,已作为药材大黄鉴别方法纳入标准。但前期工作并未建立简便快捷的蒲黄炭、槐角、地榆炭鉴别方法,本研究在临床前研究基础上对三味药材鉴别方法开展研究,并将鉴别方案纳入复黄片质量标准。原复黄片质量标准中香蒲新苷和槐角苷采用不同高效液相法分别测定,本课题对原有香蒲新苷和槐角苷高效液相色谱方案开展优化,从色谱柱、流动相体系、梯度洗脱条件等多角度开展系统筛选,建立高效液相色谱方案,以实现同一液相色谱条件下蒲黄炭及槐角的鉴别。最终色谱条件为:以Agilent TC-C18（2）（4.6×250mm,5μm）为色谱柱;以乙腈为流动相A,磷酸盐缓冲液（15mmol/L,p H2.5）为流动相B,确定条件下梯度洗脱。该色谱条件下复黄片供试品溶液整体峰形良好,香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷及槐角苷均实现有效分离。故将本方案作为蒲黄炭及槐角鉴别方法纳入标准,完善原复黄片质量标准。为解决制剂中其它药材干扰严重,地榆炭无法实现专属性鉴别的问题。本课题通过薄层色谱及高效液相色谱建立地榆炭鉴别方案,确定地榆炭特征性斑点或特异性色谱峰。最终鉴别方案为:采用前高效液相色谱方案,优化供试品溶液制备方法,建立了复黄片中地榆炭的鉴别方法。该方法验证结果表明,方法色谱图中地榆炭特征峰与相邻峰分离度良好,且阴性无干扰,专属性良好,故将本方案作为地榆炭鉴别方法纳入复黄片质量标准。香蒲新苷及异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷为药材蒲黄炭中有效成分,槐角苷为药材槐角有效成分。为从组方药材质量控制层面控制制剂产品质量,本课题在前高效液相色谱方案基础上对复黄片中三种物质含量进行测定并完成方法学考察。方法学验证结果表明,方法灵敏度高,专属性好,精密度和准确度均符合含量测定要求,故将本方案作为制剂中香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷及槐角苷含量测定方法纳入复黄片质量标准中。鞣质类和黄酮类成分均为复黄片中主要活性成分及药效成分,为从整体和内部上控制产品质量,本课题建立了复黄片总鞣质和总黄酮含量测定方法,并同步建立药材总鞣质及总黄酮含量测定方案,完成方法学验证。总鞣质及总黄酮含量测定方法的建立,进一步完善了复黄片的质量控制体系。综上所述,本课题优化原高效液相色谱方案,建立蒲黄炭、槐角及地榆炭鉴别方法;同色谱条件下完成了复黄片制剂中香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷、槐角苷含量测定及方法学验证;建立了复黄片及药材中总鞣质和总黄酮含量测定方法,进一步完善了复黄片质量标准和质量控制体系。