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目的通过给予PI3K抑制剂LY294002、m TOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC),观察大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的自噬活动变化,探讨PI3K/Akt/m TOR信号通路在染尘NR8383细胞自噬活动的调控作用及抗氧化剂NAC是否通过该通路来影响矽肺的发生和发展。方法常规培养NR8383细胞,染尘3h、6h、12h、20h、24h后,分别收集细胞上清液并采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-βⅠ(TGF-βⅠ)的分泌水平,确定体外巨噬细胞染尘模型时间。在确定的染尘时间点给予LY294002、RAPA和NAC,采用ELISA法检测、方差分析或者Kruskal-Wallis H法分析TNF-α、TGF-βⅠ的表达水平;采用蛋白免疫印迹方法测定细胞内Akt和p-m TOR蛋白水平;采用细胞免疫荧光法和蛋白免疫印迹方法(Western blotting)观察和测定自噬的发生情况。方差分析或者Kruskal-Wallis H法分析各组自噬蛋白表达情况。结果1 NR8383细胞染尘3h、6h、12h、20h、24h,ELISA法检测TNF-α、TGF-βⅠ的表达。染尘20h TGF-βⅠ的表达高于6h、12h(P<0.05),24h和20h表达含量没有差异(P>0.05)。染尘细胞的上清液中TNF-α含量在12h的表达高于3h、6h(P<0.05),20h的含量高于3h、6h、12h(P<0.05),24h和20h的含量没有差异(P>0.05)。2不同干预对NR8383细胞上清液中TNF-α和TGF-βⅠ表达影响。LY294002+矽尘组TNF-α和TGF-βⅠ表达含量均高于矽尘组,差异有统计学意义(P<0.05);RAPA+矽尘组TNF-α的分泌水平较矽尘组降低(P<0.05),而TGF-βⅠ的分泌水平在RAPA+矽尘组升高(P<0.05);NAC+矽尘组NR8383细胞上清中TNF-α含量较矽尘组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。3激光共聚焦观察NR8383细胞自噬活动。与对照组比较,矽尘组NR8383细胞LC3蛋白荧光信号增强;LY294002+矽尘组较矽尘组胞内荧光信号明显减弱;RAPA+矽尘组较矽尘组胞内荧光信号微弱;NAC+矽尘组较矽尘组胞内荧光信号无明显变化。加入溶酶体抑制剂二磷酸氯喹(chloroquine diphosphate,CDP)阻断自噬降解后,各组NR8383细胞内自噬信号表达均增强。4蛋白免疫印迹法检测Akt和p-m TOR蛋白的表达。Akt蛋白在LY294002+矽尘组的表达较空白组和矽尘组减弱。p-m TOR在RAPA+矽尘组的表达较空白度和矽尘组减弱。p-m TOR的表达在NAC+矽尘组与空白组和矽尘组比较无明显变化。5蛋白免疫印迹法检测NR8383细胞自噬活动。与对照组比较,矽尘组NR8383细胞LC3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);LY294002+矽尘组LC3蛋白表达低于矽尘组,差异有统计学意义(P<0.05);与矽尘组比较,RAPA+矽尘组NR8383细胞LC3表达呈降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);与矽尘组比较,NAC+矽尘组NR8383细胞LC3表达呈降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论1游离Si O2粉尘诱导大鼠NR8383细胞自噬增加。2 PI3K/Akt信号通路参与矽尘介导的NR8383细胞自噬变化活动中。3在染矽尘20h NR8383细胞的自噬变化活动中m TOR未参与其调控。4抗氧化剂NAC通过m TOR信号通路影响矽尘介导细胞自噬的作用较弱,其对染尘NR8383细胞介导的炎症反应有一定的抑制作用。