目的研究BAG3蛋白对结肠癌HCT-116细胞生物学功能的影响,即调节结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,旨在为进一步寻找结肠癌相关药物靶点,开发新的抗肿瘤药物提供理论基础。方法1、采用免疫组化方法检测结肠癌临床样本中BAG3蛋白的表达情况,并与临床病历资料做相关分析。2、采用慢病毒感染的方法,建立BAG3稳定过表达的HCT-116细胞系。实时定量PCR和Western blot检测BAG3的m RNA和蛋白表达水平,确认获得BAG3稳定过表达的HCT-116细胞系。3、利用CRISPR/CAS9双载体慢病毒特异性敲除BAG3。采用PCR、DNA琼脂糖凝胶电泳、Surveyor(错配酶法)法以及Western blot等手段确认BAG3特异性敲除靶点。4、采用细胞计数、平板克隆、Ed U、RTCA等实验方法检测各组细胞的增殖情况。5、细胞划痕定点修复实验和Transwell转移小室实验观察各组细胞的迁移和侵袭能力变化。结果1、BAG3蛋白在结肠癌临床样本癌组织中的表达高于在癌旁组织中的表达。2、构建BAG3过表达和BAG3敲除的HCT-116细胞系。3、在结肠癌HCT-116细胞中,过表达BAG3促进细胞增殖,敲除BAG3后抑制了细胞增殖。4、在结肠癌HCT-116细胞中,过表达BAG3增强细胞的迁移、侵袭能力,敲除BAG3后抑制了细胞迁移、侵袭能力。结论BAG3蛋白在结肠癌HCT-116细胞中发挥促存活作用,促进了结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。