猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）,是目前危害全球猪养殖业的疾病之一,被俗称为猪蓝耳病。该病主要是引起猪繁殖障碍,仔猪明显的呼吸道症状。引起该病的病原是PRRSV。Nsp2是PRRSV中最大的非结构蛋白,在PRRSV-1型PRRSV-2型毒株之间的差异较大,同时含有丰富的B细胞表位,Nsp4是一种3C样的蛋白酶,可以切割其他非结构蛋白,含有丰富的B细胞表位。临床上感染猪血清中抗NSP2和NSP4的抗体均较早出现。因此,这2个蛋白及其单克隆抗体都可以作为PRRSV感染诊断的理想靶标。本研究首先原核表达出PRRSV Nsp2和PRRSV Nsp4重组蛋白。表达产物经过SDS-PAGE验证分析,PRRSV Nsp2重组蛋白呈不溶性表达（存在于包涵体中）,PRRSV Nsp4的重组蛋白呈可溶性表达,使用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,运用尿素梯度透析法复性纯化的PRRSV Nsp2的重组蛋白。将纯化后的两个重组蛋白与弗氏完全佐剂混合乳化对7周龄的雌性BALB/C小鼠进行免疫,第三次免疫后10-14天从免疫小鼠的尾部采血分离血清,用IFA和ELISA检测小鼠体内抗体水平,对抗体效价达到细胞融合水平的小鼠进行了一次加强免疫,免疫后3-5天取小鼠的脾细胞与复苏的SP2/0细胞进行常规的细胞融合。对融合细胞培养上清进行ELISA检测,筛选出可以分泌抗体的杂交瘤细胞阳性孔,运用有限稀释法对杂交瘤细胞进行细胞亚克隆,经过两次细胞亚克隆最终制备出一株针对PRRSV Nsp2的单克隆抗体,命名为3-A8;一株针对PRRSV Nsp4的单克隆抗体,命名为B+D11。将两种杂交瘤细胞株扩大培养后分别注射到了经产母鼠的腹腔内,制备出了大量的杂交瘤细胞腹水。将制备的两个单抗应用于Western blot实验和IFA实验,发现两种单抗制备的腹水应用于Western blot实验的最佳使用稀释度是1:8000,针对PRRSV Nsp2蛋白的腹水单抗（3-A8）应用于IFA实验的最佳稀释度是1:100,针对PRRSV Nsp4单抗（B+D11）的杂交瘤细胞培养上清可用于IFA实验。本研究制备的两种单克隆抗体可以为PRRSV的研究和PRRS的检测诊断提供有利的工具,具有重要的应用价值。