【摘 要】
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近年来,我国畜禽饲料受到不同程度的镉污染。饲料中的镉不仅直接危害畜禽健康,而且通过食物链对人类健康造成潜在危害。目前防控生态环境中重金属污染的方法主要包括物理法、化学法和生物法。其中,微生物吸附法因具有安全、环保、高效等优点,已在环保领域广泛应用。然而微生物吸附法是否对镉中毒动物具有防治作用,尚缺乏动物试验支撑。本研究通过体外分离筛选禽源耐镉乳酸菌,探究分离菌株在体外对镉的吸附能力及益生特性;并挑
【基金项目】
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山东省高等学校青创科技支持计划(畜禽重要中毒病综合防控创新团队)(2020KJF009); 国家自然科学基金(31873030); 十三五国家重点研发计划项目(2016YFD0501208);
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近年来,我国畜禽饲料受到不同程度的镉污染。饲料中的镉不仅直接危害畜禽健康,而且通过食物链对人类健康造成潜在危害。目前防控生态环境中重金属污染的方法主要包括物理法、化学法和生物法。其中,微生物吸附法因具有安全、环保、高效等优点,已在环保领域广泛应用。然而微生物吸附法是否对镉中毒动物具有防治作用,尚缺乏动物试验支撑。本研究通过体外分离筛选禽源耐镉乳酸菌,探究分离菌株在体外对镉的吸附能力及益生特性;并挑选吸附能力较强的菌株进行动物试验,进一步探讨筛选菌株对鸡亚慢性镉中毒的保护效应。2020年3月到6月于不同养殖场采集13份健康鸡的粪便样品,首先用MRS培养基(含100 mg/L Cd)分离出62株耐镉菌株,经系列镉浓度(200-1000 mg/L)筛选出9株高耐受镉的菌株,经革兰氏染色、细菌生化鉴定及16S r RNA测序鉴定均为乳酸杆菌。其次,从9株菌中筛选出4株吸附能力最强的菌株,探究不同理化因素(p H、时间、镉浓度、菌体浓度)对乳酸菌吸附镉能力的影响。结果显示:(1)4株菌在p H=5时吸附效果最佳。(2)随镉浓度的升高,菌株吸附率下降,单位菌体吸附量上升。(3)随菌体浓度的升高,菌株吸附率上升,单位菌体吸附量下降。(4)随吸附时间的延长,菌株吸附率和单位菌体吸附量增加,在2 h后逐渐趋于稳定。最后,研究了4株菌在耐酸、耐胆盐、耐药和抑菌作用方面的益生特性。结果显示:4株菌有较好的耐酸能力,在p H=2.5的酸性环境下仍可存活;4株菌最高可耐受0.3%的胆盐;4株菌对常见的三种肠道致病菌(金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌)有良好抑制作用;4株菌对头孢、青霉素、林可胺和酰胺醇类药物敏感,对四环素、氟喹诺酮、磺胺和多肽类药物耐药。综合镉吸附能力和益生特性,选择CLF 9-1菌株为动物保护性试验的试验菌株。试验选取72只2周龄的雪山草鸡,随机分为六组,每组十二只。设为对照组、Cd组(100 mg/L Cd)、Cd+低乳酸菌组(100 mg/L Cd+5×10~9cfu/m L LAB)、Cd+高乳酸菌组(100 mg/L Cd+1010cfu/m L LAB)、低乳酸菌组(5×10~9cfu/m L LAB)和高乳酸菌组(1010cfu/m L LAB)。通过饮水法进行镉暴露,每日1 m L新鲜菌液灌胃,试验期6周。每周称量体重并收集各组粪便用于检测粪便镉含量;采血,分离血清测定相关酶活性;剖取主要脏器心、肝、脾、肾,进行脏器系数、镉含量检测;观察肝、肾和十二指肠组织病理学变化。研究结果显示:(1)与对照组比较,镉暴露降低了鸡增重速度,单独灌服耐镉乳酸菌对鸡生长具有一定的促进作用。(2)与对照组比较,镉暴露显著降低了肝和肾系数;与镉组比较,灌服高剂量乳酸菌后肝和肾系数显著升高(p<0.05)。(3)病理组织学检查发现镉暴露引起肝、肾损伤,表现为肝淤血、肝细胞凝集坏死、肾小管上皮细胞变性和肾小球肿胀等病理变化;十二指肠组织切片发现镉暴露降低了绒毛长度、增加了肌层厚度和隐窝深度。与镉组比较,镉加低剂量乳酸菌组肝、肾损伤减轻,十二指肠绒毛长度显著升高,肌层厚度与隐窝深度显著降低(p<0.05);镉加高剂量乳酸菌组肝、肾损伤明显减轻,十二指肠绒毛长度极显著升高,肌层厚度与隐窝深度极显著降低(p<0.01)。(4)与对照组比较,镉组血清中AST、ALT、AKP活性和BUN、CREA的含量显著升高;与镉组比较,镉加低剂量乳酸菌组AST活性显著降低(p<0.05),ALT、AKP活性极显著降低(p<0.01),BUN和CREA的含量降低,但差异不显著;镉加高剂量乳酸菌组AKP、ALT、AST活性极显著降低(p<0.01),BUN和CREA的含量显著降低(p<0.05)。(5)与镉组比较,镉与乳酸菌联合增加了粪便镉排出,减少了肝、肾镉含量。综上所述,本试验从生产中分离、筛选耐镉乳酸菌,并通过建立动物模型,证明耐镉乳酸菌对鸡亚慢性镉中毒具有一定的保护效果。本研究为开发应用于防控家禽重金属中毒和减少禽产品重金属污染的功能益生菌添加剂提供了理论基础,且微生物镉吸附法高效、环保、安全,顺应畜牧业减抗、无抗的发展趋势。
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