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目的：构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和大鼠缝隙连接蛋白43基因(Cx43)的重组慢病毒,并进行包装、纯化。方法：用RT-PCR技术获得大鼠的Cx43基因,并将其连接到含有EGFP基因的慢病毒表达载体pGC-FU中,重组获得慢病毒载体质粒pGC-FU-Cx43,采用限制性内切酶酶切法和DNA测序鉴定构建的载体是否正确。将pGC-FU-Cx43与辅助包装质粒载体(pHelper1.0、pHelper2.0)一起共转染293T细胞,包装生产病毒并测定其滴度。结果：酶切证实目的基因Cx43已经定向连入目的载体,测序结果显示,所构建的pGC-FU-Cx43重组慢病毒质粒序列与目标序列完全一致。最终获得的病毒滴度为2x109 TU/ml。结论：成功构建并包装获得较高滴度的含有EGFP基因和目的基因Cx43的重组慢病毒pGC-FU-Cx43,为后续的体外及在体研究奠定基础。目的：分离、培养、扩增大鼠BMSC,并转染重组慢病毒pGC-FU-Cx43,观察BMSC中Cx43的表达及细胞间通讯功能的变化。方法：用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离、纯化培养大鼠BMSCs,选取P3代细胞,以流式细胞仪鉴定其表面标记。重组慢病毒pGC-FU-Cx43转染P3代细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,以Western blot法检测转染后BMSC中Cx43的蛋白含量,以荧光漂白恢复技术(FRAP)检测转染后细胞间通讯功能的变化。结果：经分离、纯化得到细胞纯度较高的BMSC; pGC-FU-Cx43转染BMSC后,可见大量EGFP表达,目的蛋白Cx43的表达量明显增加,且细胞间通讯功能增强。结论：密度梯度离心法结合贴壁培养法可以有效地分离纯化BMSC。重组慢病毒pGC-FU-Cx43成功转染BMSC,目的蛋白的表达增加且细胞间通讯功能增强。目的：建立大鼠心肌梗死模型,观察移植过表达Cx43的BMSC对心梗后心衰的治疗作用。方法：120只SD大鼠随机分为四组,Sham组：假手术组,n=30; DMEM/F12组,注射DMEM/F12, n=30; EGFP组：移植转染EGFP基因的BMSC,n=30; Cx43组：移植转染Cx43基因的BMSC, n=30。采用结扎前降支的方法,建立心肌梗死模型,于梗死后30min,行细胞移植。移植后四周,超声心动图检测心脏功能并取心脏组织检测各项指标。在Langendorff离体心脏灌注系统下行心脏电生理检查,诱发心动过速。结果：与DMEM/F12组相比,EGFP组和Cx43组心功能明显改善,心肌梗死面积缩小,胶原纤维含量降低。尤以Cx43组上述心脏重构指标改善更明显。RT-PCR和Western blot显示DMEM/F12和EGFP组大鼠心肌组织Cx43表达明显降低；移植Cx43转染BMSC后,Cx43表达量增加。激光共聚焦显示EGFP组和Cx43组有BMSC存活,并可见BMSC与宿主心肌组织间有缝隙连接形成。电生理检查显示,DMEM/F12组室性心律失常的诱发率明显增高,EGFP组的心律失常的诱发率与DMEM/F12组无明显差异,Cx43组的心律失常诱发率较DMEM/F12组和EGFP组明显降低。结论：同种异体BMSC移植延缓心室重塑,改善心脏功能,且对可诱导的心律失常无明显影响；过表达Cx43的BMSC移植改善心肌梗死后心衰的效果更为明显,且可以明显降低可诱导的心律失常的发生。这可能是因为Cx43基因过表达可以改善缝隙连接重构,增加BMSC与宿主心肌细胞的电机械耦联。