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实验目的:Prolactin family 3,subfamily c,member 1(Prl3c1)是泌乳素(PRL)家族成员之一。与大多数PRL家族成员不同,Prl3c1是一种新型催乳素样基因,主要在雌性胚胎植入位点的蜕膜细胞表达,对妊娠维持起重要作用。本课题组前期发现Prl3c1表达于雄性睾丸间质细胞中并且18天C57BL/6雄性小鼠组的Prl3c1 mRNA和蛋白表达低,成年组表达增加达高峰,老年组表达降低。鉴于Prl3c1表达水平与体内睾酮水平随年龄变化趋势一致,推测其体内功能可能与间质细胞功能有关。因此本研究拟建立睾丸间质细胞Prl3c1过表达转基因小鼠并对其生物学功能进行初步研究。实验方法:1.设计引物扩增insulin like 3(Insl3)、Prl3c1、Insl3PA片段,通过融合PCR,形成Insl3-Flag-Prl3c1-Insl3PA片段,构建pPrl3c1转基因载体,测序验证。2.用受精卵原核显微注射法建立Prl3c1转基因小鼠模型。3.用免疫荧光和western blot方法鉴定Prl3c1转基因表达情况。4.用HE染色的方法观察Prl3c1转基因小鼠睾丸形态学改变情况。5.采用ELISA方法检测3月龄转基因小鼠与野生型对照小鼠血清睾酮水平(n=6)。用Western blotting分析hCG诱导的睾酮产生的机制。实验结果:1.成功的构建了pPrl3c1转基因载体。2.通过原核受精卵显微注射法成功的构建了Prl3c1转基因小鼠模型,筛选出3只Prl3c1过表达转基因F0代小鼠。3.免疫荧光与western blot实验结果显示转基因片段表达于睾丸间质细胞。4.HE染色实验结果显示Prl3c1转基因小鼠睾丸形态学未见明显改变。5.ELISA结果显示Prl3c1睾酮水平与野生对照小鼠无明显差异[(2.61±0.34)ng/mL vs(2.51±0.35)ng/mL,P>0.05],但在HCG刺激下,其水平低于野生对照组[(5.35±0.83)ng/mL vs(7.56±1.17)ng/mL,P<0.01]。Western blot实验结果表明Prl3c1过表达减弱HCG刺激的STAR表达(P<0.01)。实验结论:成功构建了睾丸间质细胞Prl3c1转基因小鼠模型,体内功能研究显示Prl3c1参与睾酮产生。