根肿病是十字花科作物的全球性重大病害之一,但可供选择的防治药剂非常有限,亟待开发新型高效低毒药剂。海洋微生物因其生境特殊,常产生异于陆地微生物的代谢产物,使其对难防治病害具有较好的防治潜力,目前已成为微生物农药开发的新热点。微生物农药通常以高活菌含量保证药剂的效果,因此对生防菌都要求进行高密度培养。海洋微生物容易产生表面活性物质,培养时会产生大量泡沫,造成装液量低、逃溢、污染等问题。因此,建立海洋生境生防菌高密度、低泡沫培养技术,是显著降低海洋源微生物杀菌剂生产成本的重要途径。本文以本课题组筛选出的一株对十字花科白菜根肿病具有显著拮抗作用的海洋生境解淀粉芽孢杆菌Txc2-1为生防菌,在前人工作基础上,进行了培养过程中消泡剂的筛选、培养工艺的优化及放大,同时对解淀粉芽孢杆菌可湿性粉剂喷雾干燥工艺和制剂配方进行优化,利用5 L发酵罐培养液制备的可湿性粉剂在盆栽和田间试验中对白菜根肿病的防效进行了初步评价。此外,还构建了带有荧光标记的解淀粉芽孢杆菌突变菌株Txc2-1-gfp,观察其在白菜根部的定殖情况。通过消泡剂的筛选获得了瞬时消泡能力和持续抑泡能力较好的消泡剂D、E,并从中筛选出与Txc2-1具有较好生物相容性的消泡剂D;通过单因素实验,确定了最适碳源G和最适氮源Q;通过响应面优化得到最佳培养基配方,在5 L发酵罐上补料培养结束时活菌含量为2.54×1010 CFU/mL,较原始工艺提高了 3.57倍,全芽孢时间36 h;在100 L发酵罐上培养结束时活菌量为1.81×1010 CFU/mL,较原始工艺提高了 1.80倍,全芽孢时间为48 h;进一步在到600 L发酵罐上放大培养结束时活菌量为2.78×1010 CFU/mL,较原始工艺提高了 2.25倍,全芽孢时间为48 h。在脱水能力为3kg水/h小型喷雾干燥塔上对解淀粉可湿性粉剂的喷雾干燥条件进行优化,确定了最佳进风口温度为190℃、最佳出风口温度为80℃;在脱水能力为800kg水/h大型喷雾干燥塔上对该条件进行验证,结果显示大型喷雾干燥塔和小型喷雾干燥塔所获得可湿性粉剂的水分、活菌量、悬浮率、死亡率等理化性质相似,而在大型喷雾干燥塔上所获得可湿性粉剂的润湿性更佳。可湿性粉剂配方优化确定了最佳载体为ZT-1,最佳润湿剂ZJ-5,最佳悬浮剂ZJ-3,经过混料配方设计后得到的最佳配比是83:9:8,在大型喷雾干燥塔上进行放大试验验证,结果与预测值较为符合。在上述工艺的基础上,利用5 L罐培养液及小型干燥塔所获得的30亿CFU/g解淀粉芽孢杆菌Txc2-1可湿性粉剂(Txc2-1WP)进行的盆栽(40天)和田间(60天)药效试验结果表明,Txc2-1WP对十字花科白菜根肿病的防效可达70.53%、66.84%,稍优于100亿cfu/克枯草芽孢杆菌WP的防效(病指防效分别为68.76%、65.38%),稍低于对照化学药剂50%氟啶胺的防效(病指防效分别为76.49%、72.45%),而相应的空白对照的病指分别为37.90和41.00。通过电击转化并筛选得到了具有荧光标记的解淀粉芽孢杆菌突变株Txc2-1-gfp,通过倒置荧光显微镜观察其在根部定殖,第4天可以在根内部组织和维管束中观察到带荧光标记菌的踪迹,定殖活菌量为7.2×108 CFU/g根部组织。30天后定殖活菌量仍保持为105 CFU/g根部组织。这表明,Txc2-1在白菜体内具有良好的定殖能力。