干细胞基因OCT4过表达对胃癌细胞侵袭迁移的影响研究

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目的:构建稳转过表达干细胞基因OCT4的胃癌细胞株。研究过表达干细胞基因OCT4对胃癌细胞的生物学特性的改变,并探讨改变这些生物学特性的作用机制。方法:构建携带OCT4基因的重组质粒,用慢病毒载体感染SGC-7901得到稳转细胞株。Transwell细胞侵袭和迁移实验、细胞划痕实验、细胞增殖实验,分别检测过表达OCT4对胃癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力的影响。.利用荧光定量PCR、细胞免疫组化、Western–Blot检测过表达OCT4的胃癌细胞中Wnt信号通路基因及胃癌干细胞标志基因表达情况。裸鼠体内成瘤实验,检测过表达OCT4的胃癌细胞的致瘤性。结果:成功构建稳转过表达OCT4基因的胃癌细胞株。Transwell细胞侵袭及迁移实验检测提示:过表达OCT4基因的胃癌细胞的侵袭迁移能力明显增强,与空白组及阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验提示:过表达OCT4基因的胃癌细胞的迁移能力明显增强,与空白组及阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。MTs实验检测表明:过表达OCT4基因的胃癌细胞的增殖能力增强,与空白组及阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光定量PCR、细胞免疫组化、Western–blot实验结果示:过表达OCT4基因的胃癌细胞的OCT4、Sox2、β-catenin、Wnt3相对表达水平都有不同程度的升高,与空白组及阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光定量PCR检测过表达基因OCT4的胃癌细胞C-myc、Klf4、CD44无明显变化,与空白组及阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。裸鼠体外成瘤实验,提示过表达OCT4的胃癌细胞的致瘤性增强,瘤体大小及瘤体重量明显增大,与空白组及阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:胃癌细胞过表达OCT4基因具有促进胃癌细胞的恶性侵袭迁移、增殖能力及致瘤性。表明OCT4基因在胃癌细胞的恶性侵袭迁移、增殖及致瘤方面发挥重要的作用。过表达OCT4基因的胃癌细胞中的Wnt信号转导通路基因β-catenin、Wnt3相对表达水平升高,提示OCT4与Wnt信号通路之间可能存在一定关系,OCT4有可能通过对wnt通路的调控来改变胃癌细胞的生物学特性。
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