植物提取物对害螨的防治作用研究

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本试验采用室内生物活性测定法,初步研究了沈阳大学及周边绿地的15科18种含有生物碱、黄酮、香豆素等杀虫物质的植物对二斑叶螨雌成螨和卵的触杀活性,从中筛选出杀螨活性较好的植物—臭椿;对臭椿提取物进行了系统的生物活性测定;采用活性跟踪法,对臭椿中的杀螨活性成分进行了分离、纯化,从而为安全、环保的植物源杀螨剂的研制奠定基础。主要研究结果如下:1.杀螨植物的初步筛选本试验采用冷浸法利用无水乙醇从15科18种植物中提取植物粗提物,通过玻片浸渍法和叶片浸渍法对二斑叶螨的雌成螨和卵进行触杀活性测定,结果发现,处理一段时间后18种植物乙醇提取物均对二斑叶螨雌成螨和卵表现出一定的触杀活性。其中,紫茉莉、臭椿叶、鸡爪槭、紫花地丁、牛膝菊和藜这六种植物提取物对二斑叶螨雌成螨的触杀活性较强,在10mg/mL时其72h校正死亡率均为100%,对卵的触杀活性与其余12种植物提取物相比较高,但不如对雌成螨的触杀活性强。随后,测定了紫茉莉、臭椿叶、鸡爪槭、紫花地丁、牛膝菊和藜这六种植物乙醇提取物对二斑叶螨雌成螨和卵的室内毒力,这六种植物提取物对雌成螨的LC50在3.679和7.378mg/mL之间,对卵的LC50在11.176和60.651mg/mL之间,毒力较强。综合比较六种植物提取物对害螨雌成螨和卵的触杀活性及毒力,发现臭椿叶乙醇提取物的杀螨活性最好。2.臭椿提取物的系统杀螨活性研究本试验选取了石油醚、丙酮、氯仿和乙醇这四种极性不同的溶剂对臭椿叶进行了室内平行提取,得到4种溶剂提取物。在这四种溶剂中提取率最高的是乙醇,其次为丙酮、氯仿和石油醚,这说明臭椿叶中极性成分含量较高。采用室内玻片浸渍法和叶片浸渍法分别测定了这四种溶剂提取物对二斑叶螨雌成螨和卵的生物活性,结果发现:石油醚、丙酮、氯仿和乙醇这4种溶剂提取物对害螨雌成螨处理24h后的校正死亡率分别为51.22%、64.63%、36.59%、88.10%;处理48h时校正死亡率分别为62.50%、88.75%、78.75%和96.15%;7d内卵的孵化率分别为92.22%、91.11%、81.11%和51.11%。臭椿乙醇提取物对害螨雌成螨和卵的触杀活性较高,故后续实验中的最佳溶剂为乙醇。随后利用臭椿乙醇提取物对二斑叶螨雌成螨进行了系统的杀螨活性研究:臭椿乙醇提取物对二斑叶螨雌成螨表现出较强的产卵抑制作用,当浓度为12.8mg/mL时,其产卵抑制指数在24h和48h时分别为0.9883和0.9933,产卵抑制率分别达到99.40%和99.66%;臭椿乙醇提取物对害螨也表现出较强的驱避作用,当浓度为6.4mg/mL和12.8mg/mL时处理12h后驱避率分别达到86.67%和100%;在测定臭椿乙醇提取物对害螨雌成螨毒杀活性时发现处理72h后,0.8mg/mL溶液对害螨的校正死亡率超过了50%,这也表明臭椿乙醇提取物对害螨有较强的毒杀作用。3.臭椿杀螨活性成分的追踪分离通过不同极性溶剂液-液萃取法、柱色谱层析法和薄层层析分离技术对臭椿乙醇提取物进行了活性成分分离,在室内测定了不同分离组分对二斑叶螨雌成螨的触杀活性。臭椿乙醇提取物在水相中萃取率最高(51.30%),其次为正丁醇(27.60%)、乙酸乙酯(11.50%)和石油醚(9.60%)。采用微量进样器定量点滴法进行生物活性测定,处理24h后正丁醇相对二斑叶螨的触杀活性最强(44.94%),乙酸乙酯相和水相次之(20.22%和17.98%),石油醚相的生物活性最弱(4.49%);处理72h后正丁醇相对害螨的触杀活性达到100%,乙酸乙酯相其次(97.33%),石油醚相最弱(69.33%)。随后测定了正丁醇萃取物对二斑叶螨雌成螨和卵的毒力,最终确定臭椿有效成分主要存在于极性较大的正丁醇萃取物中,经过硅胶柱层析结合薄层层析最终确定了22个组分,通过室内触杀活性测定比较,发现第10组分为最佳活性成分,在处理48h后对害螨的校正死亡率为48.53%。
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