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华支睾吸虫病(clonorchiasis)又称肝吸虫病,是我国常见的食源性寄生虫病,流行于25个省市、自治区。全国现有肝吸虫感染者1500万。华支睾吸虫成虫可长期寄生于人的肝胆管内,对肝胆系统造成慢性损伤,引起胆管局限性扩张、胆管炎、胆管上皮细胞腺瘤样增生、肝硬化甚至诱发肝胆管肿瘤。作为我国最重要的食源性寄生虫病,引起了国家的高度重视,被列为国家重点防治的目标疾病之一。华支睾吸虫病的正确诊断是防治的关键。目前华支睾吸虫病的诊断主要依靠病原学检查和免疫学检测。传统的病原学方法容易漏诊,且操作费时费力,目前用于华支睾吸虫病诊断免疫学诊断方法假阴性和假阳性率都比较高,且存在诊断抗原的来源困难和难以标准化的问题。因此,华支睾吸虫免疫诊断抗原的筛选和评价是华支睾吸虫病研究的重点。ELISA法测定日本大耳白兔和小鼠感染后1w,10d,2w,3w,4w,5w,7w,9w,11w,13w,15w血清中抗成虫抗原特异性抗体的动态变化。于感染后第2～9w升高,约在第10w达到高峰,此后维持高峰至观察结束的第15w。免疫筛选表达文库,获得23个阳性克隆,筛选到富含甘氨酸克隆7个;与韩国学者报导的富含脯氨酸同源基因6个,具55%～84%的同源性;与报导的Cs44同源性为98%;日本血吸虫的的SJCHGC06649 protein同源性为60%的基因一个;7个克隆与线粒体序列同源。筛选的这些基因均相似的跨膜区和信号肽序列。将CS-gly基因克隆至PET28a表达质粒,分别用EcoRI和XhoI酶切鉴定及测序鉴定,结果表明成功构建了重组表达质粒,将阳性重组质粒转化至大肠杆菌DE3中,IPTG诱导表达, SDS-PAGE分析CS-gly蛋白的存在形式。发现CS-gly在预期分子量处出现目的条带,相对分子量分别为14.72kD。Western bloting分析,确定了cs-gly蛋白能被兔抗华支睾阳性血清识别。本研究为进一步将华支睾吸虫高反应抗原基因进行重组,表达复合基因重组抗原,建立敏感、特异的华支睾吸虫病免疫学检测方法及疫苗研制和功能基因等研究奠定基础。