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大叶落地生根为研究景天酸代谢以及植物细胞全能的模式植物,研究其体细胞胚胎形成有着何种分子机制对于植物细胞学研究有着重要意义。同时,建立大叶落地生根的再生体系能够为难取材、难生芽的植物提供参考以及体系基础。本研究为探究大叶落地生根胎生苗以及再生体系体细胞胚的发生机制,建立了大叶落地生根的再生体系。再生体系的建立主要分为诱导愈伤组织、诱导生芽以及诱导生根三个步骤,生芽实验采用了三种方案,即分别添加三种不同浓度配比激素6-BA:2,4-D=10:1、6-BA:IAA=10:1、KT:2,4-D=10:1。同时,在诱导大叶落地生根愈伤组织时将其愈伤组织进行继代培养,观察其外部形态,记录其褐化和水渍化率,通过实时荧光定量PCR的方法测定继代的大叶落地生根愈伤组织基因相对表达量的变化。为研究再生体系与大叶落地生根的胎生苗发生过程中体细胞胚的发生机制,在构建大叶落地生根再生体系的同时采用实时荧光定量PCR的方法测定再生体系中三个重要时期的基因相对表达量的变化,共测定四种在体细胞胚发育中具有重要作用的CUC1、STM、PIN1、CYCB1四种基因,以Actin作为内参基因,选取三个具有代表性的时期,分别为生芽诱导0日的愈伤组织、生芽诱导30日的愈伤组织、生芽诱导60日的愈伤组织;叶片所选取的三个时期分别为未生缺刻的叶片、生出缺刻的叶片和生出胎生苗的叶片。结果表明大叶落地生根愈伤组织继代至第三代时其褐化和水渍化率升高至34.3%,在持续继代的过程中其褐化和水渍化率逐渐升高,于第六代时高达97%。观察其外部形态虽有水渍化和褐化的情况,但从实时荧光定量PCR的结果看至继代第三代时所测的四种基因的相对表达量变化不明显。愈伤组织诱导时部分以茎段为外植体材料的在诱导时出现部分生芽的现象,生芽概率为17.9%,将生芽的茎段放入1/2Ms培养基1周可生根。愈伤组织的生芽诱导中三种激素配比只有6-BA:IAA=10:1这种激素配比下愈伤组织能够在2个月左右时生芽,生芽率为27%,将未生芽的愈伤组织继续诱导后4个月时生芽率为30%。生芽后的愈伤组织放入生根诱导培养基1周可生根。实时荧光定量PCR的结果显示能够生芽和不能生芽的激素配比下基因的相对表达量有多处不同,再生体系所选的三个时期与胎生苗繁殖中所选的三个时期的基因相对表达量的变化显著不同。