小菜蛾Bt Cry1Ac抗性主效基因的遗传定位

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shenzhixian
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小菜蛾Plutella xylostella(L.),属鳞翅目菜蛾科,是十字花科作物重要害虫,在世界各地广泛分布。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt),属于革兰氏阳性细菌,它在产胞过程中能产生多种杀虫晶体蛋白,对多种靶标害虫具有高效专一的毒杀作用,然而,Bt生物杀虫剂大量不合理使用不可避免的导致害虫对Bt产生高抗性。因此,阐明害虫对Bt产生抗性的分子机制对于Bt可持续应用和田间害虫抗性综合治理至关重要。本实验室前期小菜蛾Bt抗性分子机制研究发现小菜蛾对Bt Cry1Ac抗性是蜕皮激素(20E)和保幼激素(JH)含量升高激活经典的BtR-1抗性基因座内有丝分裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径上游的PxMAP4K4基因进而反式调控多个中肠Cry1Ac抗性基因差异表达导致的。对于小菜蛾Bt抗性分子机制也并未从正向遗传学进行解析,本研究就通过遗传学方法的小菜蛾Bt Cry1Ac抗性基因进行定位。首先对小菜蛾Bt Cry1Ac敏感种群DBM1Ac-S种群和抗性种群NIL-R各50头蛹进行重测序、变异检测、群体结构分析及全基因组关联分析(GWAS),发现953个与抗性性状关联的SNP和390个与抗性性状关联的Indel分别位于34个scaffold和29个scaffold上。与新组装的基因组比对后确认所有显著关联的位点均位于scaffold NW-024010942上。随后我们依据两相遗传法则构建回交品系,利用筛选出的合适的SNP标记在186个经毒素处理后存活的F2个体中进行克隆,将抗性连锁区域定位与跨度为0.91Mbp的区间,该区间含有ABC转运蛋白家族基因和MAP4K4基因。基于上述研究我们确定了小菜蛾Bt Cry1Ac抗性连锁的区域,初步确定了抗性的候选基因,为进一步明确抗性突变位点奠定基础。
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