【摘 要】
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目的:自噬在青光眼的病理生理过程发挥重要作用。本文研究自噬诱导多肽Tat-beclin1 对慢性高眼压（Chronic Ocular Hypertension,COH）大鼠视网膜神经节细胞（Retinal ganglion cells,RGCs）的保护作用及机制。方法:Sprague-Dawley大鼠前房内注射体外培养的结膜成纤维细胞建立COH 模型,用 Tono-Lab 眼压计测量大鼠眼内压（I
【基金项目】
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基金项目:国家自然科学基金（81170841，81570844）; 厦门市科技项目（3502Z20149026）; 华厦转化医学基金项目（2017-A-003）
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目的:自噬在青光眼的病理生理过程发挥重要作用。本文研究自噬诱导多肽Tat-beclin1 对慢性高眼压（Chronic Ocular Hypertension,COH）大鼠视网膜神经节细胞（Retinal ganglion cells,RGCs）的保护作用及机制。方法:Sprague-Dawley大鼠前房内注射体外培养的结膜成纤维细胞建立COH 模型,用 Tono-Lab 眼压计测量大鼠眼内压（Intraocular Pressure,IOP）。1w后对照组大鼠右眼玻璃体腔注射5μl 100μM乱序（scrambled）Tat-beclin1,治疗组大鼠右眼玻璃体腔内分别注射5μl 50μM、100μM和200μM的Tat-beclin1。左眼作为假手术对照。于2w、4w、8w后处死大鼠,处死前1w用荧光金逆行标记RGCs并计数,TUNEL染色法检测RGCs凋亡,苏木精伊红（H＆E）染色观察视网膜组织改变。取大鼠完整视网膜,蛋白免疫印迹（Western blot）法分析测定凋亡执行因子cleaved-caspase3及自噬相关蛋白beclin 1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平。结果:大鼠前房注射结膜成纤维细胞后IOP升高,维持在8w以上,波动范围为22-36mmHg（平均27.5mmHg）之间,而对照眼IOP维持在10-15mmHg（平均11.4mmHg）之间,差异具有显著性（P<0.01）。荧光金染色显示玻璃体腔注射50μM和100μM Tat-beclin1治疗组的RGCs密度显著高于对照组（P值均小于0.05）,200μM Tat-beclin1治疗组显著低于对照组（P<0.05）。COH 8w后的大鼠 RGCs 密度（对照组:1302±121 个/mm2;Tat-beclin1 治疗组:50μM 组:1501±143个/mm2;100 μM组:1417±128个/mm2;200μM组:969±115 个/mm2）显著低于 COH 4w（对照组:1402±151 个/mm2;Tat-beclin1 治疗组:500μM 组:1548±143个/mm2;100 μM组:1483±150个/mm2;200μM组:1341±135 个/mm2）和 COH 2w（对照组:1470± 108 个/mm2;Tat-beclin1 治疗组:50μM 组:1680±143个/mm2;100μM组:1661±148个/mm2;200μM组:1454±130个/mm2）的密度。Tat-beclin1 50μM和100 μM治疗组TUNEL染色阳性细胞数目显著少于对照组,而Tat-beclin1 200μM治疗组阳性细胞多于对照组。Western blot分析结果显示Tat-beclin1治疗组随着给药剂量增加beclin1的水平有上升趋势,同时LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值上调。结论:Tat-beclin1玻璃体内注射诱导慢性高眼压大鼠视网膜产生自噬反应;低浓度的Tat-beclin1有抑制RGCs凋亡的作用,高浓度促进RGCs凋亡。
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