论文部分内容阅读
目的:多囊卵巢综合征是一种以无排卵和高雄激素为主要特征的内分泌病症候群，近年来，胰岛素抵抗被认为是导致多囊卵巢综合征各种临床症状的主要病理生理机制。PCOS患者易发展为肥胖、胰岛素抵抗、黑棘皮症、2型糖尿病、血脂异常、高血压、非酒精性肝病以及梗阻性呼吸睡眠暂停。因此改善胰岛素敏感性是多囊卵巢综合征的治疗重要环节。噻唑烷二酮类(TDZs)是一种过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)激动剂，作为胰岛素增敏剂已证实对PCOS具有确切的疗效。小檗碱(Berberine)是一种异喹啉生物碱主要由传统中药如黄连提取出来，具有广泛的生化和药理活性，葛根素是从野葛或粉葛的干燥根中提取而成的，已证实对2型糖尿病具有降糖降脂的作用。小檗碱与葛根素作为胰岛素增敏剂具有与噻唑烷二酮类药物相近的改善胰岛素抵抗的作用。本研究的目的是观察小檗碱对行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的PCOS患者的治疗效果，并探讨小檗碱与葛根素改善胰岛素抵抗的作用机制。 方法: 1、对拟行IVF-ET的PCOS患者给予小檗碱、二甲双胍及安慰剂治疗12周，对用药前后的体重、腰臀围、血糖、血脂、性激素水平进行临床观察，并结合其IVF治疗后结局情况进行数据研究。 2、PCOS患者卵巢颗粒细胞(GLCs)体外分组培养。行体外受精治疗的PCOS患者穿刺取卵后，留取卵泡液分离颗粒细胞进行分组培养。共6组分别加入小檗碱、吡格列酮、小檗碱+GW9662(PPARγ特异性拮抗剂)、葛根素组、葛根素+GW9662组，而空白对照组则加入0.4μL DMSO的2mL DMEM培养液 3、采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各用药组颗粒细胞PPARγ、葡萄糖载体蛋白-4(GLUT4)和胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达水平。 4、采用实时荧光定量PCR技术(Realtime-PCR)检测各用药组颗粒细胞PPARγ、GLUT4、和IRS-1 mRNA表达水平。 结果: 1、与二甲双胍比较，小檗碱治疗后BMI显著下降(p＜0.05)，TC、LDL-c降低也较为显著(p＜0.05)。同样小檗碱治疗后与安慰剂比较，WHR，FPG，FIN，HOMA-IR，TC，LDL-c及T显著降低(p＜0.05)，而SHBG显著升高(p＜0.05)。IVF治疗前应用小檗碱及二甲双胍治疗三个月后，临床妊娠率增加，卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率降低，促排卵过程中总FSH剂量小檗碱组低于二甲双胍和安慰剂组(p＜0.05)，然而HCG日E2水平小檗碱组和二甲双胍组较安慰剂组均明显降低，同时小檗碱组较二甲双胍组较少出现胃肠道反应。 2、小檗碱和吡格列酮均能上调卵巢颗粒细胞中PPARγ、IRS-1，GLUT4mRNA及蛋白的表达，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，但二者之间比较差异无显著性。添加PPARγ特异性阻断剂GW9662后，小檗碱对PPARγ，GLUT4，IRS-1 mRNA及蛋白的表达作用明显减弱(P＜0.05)，葛根素仅能上调卵巢颗粒细胞中GLUT4mRNA及蛋白的表达，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05) 结论: 1、小檗碱是针对PCOS的有效治疗药物，能够调节血脂，改善向心性肥胖，降雄激素，增加IVF患者的妊娠率，降低OHSS发生率，更重要的是同二甲双胍相比能够增加活产率同时减少了胃肠道副反应。 2、小檗碱与二甲双胍比较，改善糖耐量异常的作用二者相当，然而降脂作用小檗碱优于二甲双胍，小檗碱因其用药安全性高且廉价更有利于PCOS患者长期服用。 3、小檗碱及吡格列酮均能上调PCOS患者GLCs中PPARγ mRNA及蛋白的表达。小檗碱与吡格列酮对胰岛素抵抗调节机制相同，也是作为PPARγ的配体与之结合并激活PPARγ而发挥作用。 4、小檗碱和葛根素对胰岛素作用途径关键环节GLUT4蛋白和mRNA表达均有上调作用，提示小檗碱和葛根素均能够在卵巢水平改善胰岛素抵抗。 5、PPARγ特异性抑制剂GW9662能够阻断小檗碱对颗粒细胞中PPARγ、IRS-1和GLUT4表达的影响，小檗碱在卵巢水平可能是通过PPARγ发挥改善胰岛素抵抗作用。