miR-124通过调控flotillin-2对精子顶体形成的作用和机制研究

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目的:研究miR-124通过调控flotiliin-2对精子发生过程中顶体形成的作用,并进一步探讨miR-124在顶体形成过程中的表达机制。方法:首先,运用生物信息学软件验证miR-124与flotillin-2的mRNA 3’-UTR存在互补结合位点;然后,采用双荧光素酶报告基因技术探讨miR-124对flotillin-2的靶向调控关系;接着,采用睾丸网微注射技术,将miR-124活性片段直接注射入三周龄雄性小鼠的生精小管,48小时后运用实时荧光定量PCR和蛋白免疫技术验证miR-124对flotillin-2的影响;最后,在睾丸网微注射三周后,运用光学显微镜和透射电镜观察小鼠精子的形态。结果:生物信息学证实miR-124与flotillin-2的mRNA 3’-UTR存在直接互补结合位点。当miR-124表达上调,flotillin-2的表达水平下降,miR-124对flotillin-2的表达起着负向调节的作用。与对照组相比,实验组的精子畸形率明显增加(28.5%vs.19.9%,P=4.68*10-5),特别是头部畸形(20.7%vs.13.7%,P=0.025),这些差异存在统计学意义,并且大部分头部畸形精子的顶体都有异常。透射电镜显示头部畸形小鼠精子的超微结构为:1)顶体缺失:2)顶体形态异常--顶体中存在分散的、没有融合的小颗粒或小囊泡;存在较大的顶体囊泡;存在残留的或退化的高尔基复合体。结论:miR-124可以通过调控flotillin-2的表达影响精子顶体的形成,为探索精子发生过程中顶体形成的的分子机制奠定基础,同时为男性不育的诊断和治疗提供新的理论依据和干预靶点。
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