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研究背景和目的舌为口腔内鳞状细胞癌最常见的原发部位之一,多呈浸润生长,易发生早期转移。舌癌发病率近期呈增长趋势,其早期转移率为37%～85%,故研究舌鳞癌的治疗方法并为其提供理论基础有重要的意义。抗肿瘤血管形成是治疗肿瘤有效的方法,针对性的抑制相关肿瘤血管形成因子的表达是目前研究的热点。本实验在缺氧条件下给予不同剂量的诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)抑制剂1400W作用不同时间,观察其对人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS活性和变化及iNOS.基质金属蛋白酶-9 (matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的影响及相关性,,以探讨抑制iNOS表达,治疗舌鳞癌的可能性。研究内容和方法1.在体外正常培养条件下,实验组分别采用浓度为50,100,200,400μmol/L的1400W对相同条件CAL-27细胞作用,并设计不加1400W的细胞组为对照组,24,48,72,96h后,分别用硝酸还原酶法测定各组人舌鳞癌细胞株CAL-27细胞培养上清液中一氧化氮(Nitric oxide, NO)的含量水平；并使用RT-PCR检测各组人舌鳞癌细胞株CAL-27中iNOS和MMP-9 mRNA表达的变化。预实验确定实验最佳的浓度为200μmol/L,最佳的时间为72h。2.在体外缺氧培养条件下,分别采用浓度为50,100,200,400μmol/L的1400W对相同条件CAL-27细胞进行作用,并设计不加1400W的细胞组为对照组,72h后分别用硝酸还原酶法测定各组人舌鳞癌细胞株CAL-27细胞培养上清液中NO水平;并使用RT-PCR法检测各组人舌鳞癌细胞株CAL-27细胞中iNOS和MMP-9mRNA表达的变化。结果1.培养上清液NO含量检测结果显示,在实验室常规条件培养下,不同浓度1400W作用于细胞后,对实验组各组细胞的NO释放均有抑制作用,用50、100、200、400μmol/l 1400W作用细胞72h后,细胞培养上清液中NO水平分别为36.36±1.4,33.23±1.5,21.59±3.0,29.55±2.2μmol/l。且同一时间点各实验组与对照组相比差异有显著性(P<0.05),1400W对CAL-27各实验组细胞NO释放的抑制在实验范围内可随着剂量的增加和时间的延长呈相就减小关系;其中在缺氧条件下,50μmol/l、100μmol/l、200μmol/l、400μmol/l 1400W处理相同细胞72h后,细胞培养上清液中NO水平分别为28.81±2.3、21.71±2.9、17.19±2.7、18.67±2.6μmol/l,和对照组相比,NO含量明显降低(P<0.05),并且随时间和剂量的增加而相应递减。2. RT-PCR检测结果显示：(1)体外缺氧培养条件下(5%CO2,95%N2),200μmol/l 1400W作用于细胞0,24,48,72,96h后,iNOSmRNA表达水平量分别为0.269±0.009、0.201±0.010、0.147±0.008、0.135±0.007、0.146±0.008(以MMP-9、iNOSmRNA与GAPDH的比值作为MMP-9、iNOSmRNA表达的相对含量)；MMP-9mRNA表达量分别为1.26±0.04、1.09±0.08、0.69±0.03、0.40±0.03、0.59±0.02。不同浓度的1400W均能抑制iNOSmRNA表达(P<0.05)、MMP-9mRNA表达(P<0.05)。(2)体外缺氧培养条件下(5%CO2,95%N2),不加1400W的对照组、50μM组、100μM组、200μM组、400μM组作用细胞72h后,iNOSmRNA表达量分别为0.248±0.008、0.210±0.010、0.171±0.011、0.135±0.007、0.140±0.009；MMP-9mRNA表达量分别为1.05±0.02、1.36±0.03、0.91±0.03、0.40±0.03、0.62±0.05。不同浓度的1400W均能抑制细胞iNOSmRNA表达(P<0.05)、MMP-9mRNA表达(P<0.05)。结论选择性iNOS抑制剂1400W可显著抑制实验室培养的人舌癌细胞株CAL-27的增长,可能因其直接杀伤细胞和抑制MMP-9表达有关。提示1400W对舌癌生长和转移可能有抑制作用。为临床使用选择性iNOS抑制剂治疗舌鳞癌提供了实验及理论依据。