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背景： 多发性硬化症(multiple sclerosis，MS)是以局灶性脱髓鞘为特征的中枢神经系统(CNS)感染性疾病，被认为是髓鞘特异性T细胞介导的自身免疫性疾病。全世界约有110万患者，女性是男性的两倍。MS病因不明，认为环境和基因因素都起了重要的作用，发病率因区域不同而有明显差别；基因组研究发现MS易感基因主要与第6号染色体上的HLA-DR和HLA-DQ的某些等位基因相关。细胞和体液免疫反应都参与了MS的病理损害过程，髓鞘蛋白自身反应性T细胞在MS自身免疫过程中起了非常重要的作用，研究认为髓鞘碱性蛋白(MBP)反应性T细胞可使脑白质内的髓鞘破坏，并引起灰质内神经元继发变性坏死。动物研究证实MS病程中CNS的灰质和白质中都有凋亡细胞出现，凋亡细胞中更多的是淋巴细胞，且凋亡的T淋巴细胞主要是MBP特异性淋巴细胞。 MBP是髓鞘蛋白的主要成分之一，约占髓鞘蛋白质总量的30％。MBP能引起MS的动物模型—实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。MBP(85-99)免疫表位是MS患者的免疫优势表位，能和HLA-DRB1*1501分子结合，其复合物晶体结构已确定，MS患者的TCR识别DRB1*1501-MBP(85-99)复合物而激活T细胞，T细胞进入CNS后克隆扩增，引起一系列免疫反应导致MS发病，在MS病灶中可以检测到DRB1*1501-MBP(85-99)复合物抗体。 MS病理研究发现，患者脑白质病灶中有T细胞、巨噬细胞的浸润和局部脱髓鞘病变，MS新鲜病灶内T淋巴细胞浸润更多，病理改变不仅累及白质，亦可累及灰质，MS的脑病变不仅有白质髓鞘的脱失，其灰、白质内的神经元细胞也受到侵害。传统理论认为神经元的变性是由髓鞘损害继发引起的，但研究发现活动期MS患者脑脊液(CSF)和CNS病损区有大量的CD4+、CD8+细胞沉积，这些T细胞到底起那些作用，能否直接损害神经元，没有实验研究证实。目的: 对MS病人自身免疫过程中的自身反应性T细胞的研究虽然很多，但自身反应性T细胞作用于CNS神经元细胞和髓鞘的形态学研究却匾乏，其引起MS的作用方式亦大都是理论上的假说，尤其对神经元的直接研究更加不足。本实验旨在体外研究观察N正P诱导的淋巴细胞能否直接作用于人脑神经元细胞，使神经细胞变性坏死;如有直接损害作用，那么鉴定CD4+细胞、CDS+细胞、NK细胞等T细胞亚群到底那种更起到明显的直接损害作用;检测对神经元和髓鞘直接作用的MBP诱导的淋巴细胞亚群有无不同，以便进一步探讨MS发病的细胞学机制。方法: 首先合成MBP免疫优势表位肤段83一ENPVVHR日。qvTpRTp一99肤段;用MTT法测定MBP合成肤的淋巴细胞转化率并找到其合适的工作浓度;流式细胞仪测定MBP合成肤诱导的T细胞亚群的变化;用MBP合成肤诱导培养的淋巴细胞与人脑神经元细胞共同混合培养，进行了扫描电镜观察，以发现MBP特异性淋巴细胞对神经细胞和髓鞘有无明显的聚集、薪附和攻击作用，神经元和髓鞘有无损伤;最后用CD分子荧光单克隆抗体染色方法，鉴定作用于神经元和髓鞘的MBP特异性T细胞的亚群种类，以便明确CD4+、CDS+细胞和自然杀伤T细胞(NK细胞)中，叨阵一个亚群起到更明显的直接作用，并比较作用于神经元和髓鞘的T细胞亚群是否不同。结果: M竹法测得的MBP(s3一99)合成肤可较好地诱导淋巴细胞转化，其合适的工作浓度在12.5u留ml以上;流式细胞仪测定MBP合成肤诱导的淋巴细胞中CDS+细胞比例升高;CD4+，NK细胞变化不明显;扫描电镜观察发现，MBP合成肤诱导的淋巴细胞与人脑神经元细胞和髓鞘有明显的聚集、薪附和攻击作用，MBP特异性淋巴细胞不仅直接作用于轴突的髓鞘，造成髓鞘脱失，还可能直接作用于人脑神经元，使神经细胞变性坏死;荧光抗体染色法检测到:MBP特异性淋巴细胞中CD4十、CDS+细胞和NK细胞亚群都对神经细胞有砧附作用，CD4+、CDS+细胞绝对数较多，NK细胞数较少，还可见到少量的CD3+l CD56+细胞，但具体作用部位需进一步确定，对神经元和髓鞘直接作用的MBP诱导的淋巴细胞亚群暂未发现有明显不同。结论: 合成的MBP(83一99)免疫优势表位肤段能诱导淋巴细胞转化，并使T淋巴细胞亚群的比例发生变化;MBP特异性淋巴细胞不仅直接作用于轴突的髓鞘，造成髓鞘脱失，还可能直接作用于人脑神经元，使神经细胞变性坏死;MBP特异性淋巴细胞中CD4十、CDS十细胞和NK细胞亚群都对神经细胞有薪附作用，可能这些细胞中的一种或两种直接作用于人脑神经元，使神经细胞变性坏死，CDS+淋巴细胞可能直接作用于轴突的髓鞘，造成髓鞘脱失，淋巴细胞的杀伤作用还需进一步探索;淋巴细胞也存在凋亡现象，多伴随着神经元变性和髓鞘脱失而发生。这种可能的细胞直接杀伤作用，尤其是对神经元的杀伤作用研究，是一个崭新的观点，进一步说明了MBP自身反应性淋巴细胞在MS发病过程中起重要作用。这种直接作用可能是多发性硬化症早期的发病机制之一。 此研究创新之处:在MS发病过程中，MBP特异性淋巴细胞不仅直接作用于轴突的髓鞘，造成髓鞘脱失，还可能直接作用于人脑神经元，使神经细胞变性坏死，而且可能不只一种T淋巴细胞亚群发挥作用。这?