自发现核酸疫苗以来，这种新型疫苗在畜禽疾病上的研究日益广泛，而且许多研究结果已经显示出其巨大优势。由于对核酸疫苗的需求将逐渐扩大，但是目前生产高纯度的核酸疫苗的成本很高，限制了核酸疫苗推广应用，尤其是在畜禽疾病的研究和应用上更受到限制。本研究旨在探索小批量低成本制备高纯度核酸疫苗的方法和条件，并对本研究室所构建的NDV HN基因核酸疫苗的体内表达以及免疫效果进行检测。首先，对用作核酸疫苗的重组质粒DNA提取过程进行了条件优化。对转化细菌进行扩增培养，绘制重组细菌的生长曲线。结果表明细菌在37℃、200rpm振荡培养条件下培养14 h，细菌生长达到最高密度，从而确定了细菌最佳的培养时间。然后利用最佳的培养时间大量扩增细菌，并分别在两种条件下对细菌进行裂解：用常规碱裂解法裂解细菌时，组成裂解液中的三种成分分别以两种不同比例对细菌进行裂解比较，结果表明裂解菌体所用溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的比例为1︰1︰1时提取的质粒有两种构像，三种溶液的比例为2︰4︰3时所提取的质粒有三种构像，说明前者效果较好。接着用优化的裂解条件对培养的细菌进行裂解，再分别利用异丙醇沉淀法和乙醇沉淀法沉淀裂解液中的质粒DNA。比较由这两种条件沉淀的质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳结果，发现它们的差异不显著，但异丙醇沉淀法操作比较简便。最后比较了LiCl+PEG联合沉淀法、Q-Sepharose FF色谱法、DEAE-纤维素色谱法以及羟基磷灰石（HA）柱层析法对重组质粒DNA进行纯化的效果。结果表明，LiCl+PEG8000联合沉淀法虽然能够分离出RNA和质粒DNA，但是产量比较低；用Q-Sepharose FF纯化质粒DNA时用0.05mol/L NaCl 50 mmol/L MOPS（pH8.0）洗脱液能够洗脱出较纯的质粒DNA；DEAE-纤维素由于洗脱的离子强度范围较窄，而且吸附能力有限，出现蛋白质、RNA和DNA的洗脱峰相互重叠在一起的现象，所以未能获得理想的纯化效果；用羟基磷灰石（HA）纯化质粒DNA时用离子强度为0.3mol/L NaH2PO4-Na2HPO4（pH6.8）洗脱可得到较为纯净的产品，但是其产量也比较低。综合比较，发现实验室条件下用Q-Sepharose FF色谱法纯化质粒DNA较为理想，所以本研究确定该法作为核酸疫苗的纯化方法。 其次，利用所纯化的NDV HN基因的核酸疫苗分别免疫Balb/c小鼠（100μg/只）和SPF鸡（200μg/只）。小鼠分为5组，分别免疫2~3次，其中三组免疫核酸疫苗，一组注射PBS对照，一组注射质粒载体，每次免疫间隔为2周。小鼠首免后每周从尾静脉采血分离血清，利用ELISA技术检测血清中IgG抗体变化。结果表明用NDV HN基因的核酸疫苗免疫Balb/C小鼠，在免疫两周后产生了针对NDV的抗体，并且在免疫6周后达到最高值。SPF鸡免疫两次，每次免疫间隔两<WP=4>周。首免后每周对6只鸡采血分离血清通过ELISA法检测血清中IgG抗体。ELISA结果表明首免两周后SPF鸡产生了针对NDV的抗体，在二免4周后抗体达到最高值。综上所述，本研究的实验结果表明，选择Q-Sepharose FF阴离子交换色谱纯化了用作核酸疫苗的重组质粒DNA；该纯化的核酸疫苗在Balb/C小鼠和SPF鸡体内均得到了表达，但是抗体的效价明显低于灭活疫苗组, 因此在如何增强该核酸疫苗在鸡体内免疫效果方面还需要进一步的改进和完善。