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在过去的五十年里,人类在医学领域取得了空前的成功,但是癌症仍然是对人类生存最严重的威胁之一。当前的癌症治疗主要包括传统的外科手术、化学治疗、放射线、生物和激素治疗,其中化学治疗在临床上占有重要地位,但化疗药物对正常组织的强毒性也成为化疗实施的主要障碍。此外,基于癌症的复杂性,如果单纯地使用一种治疗方法或者一种抗癌药物会使患者对特定药物产生耐药性,采用多种抗肿瘤药物联合使用,在降低药物剂量的同时,也可以减少对正常细胞的毒性和延缓耐药性,因此,联合用药临床治疗逐渐受到重视。抗癌肽（ACP）由于具有抗癌活性广谱、免疫原性小、杀灭癌细胞迅速、有一定的选择性、优异的组织渗透性、不易产生耐药性、合成容易等优点,并且易于修饰以增强体内稳定性和生物活性,使其具备开发成为新一代抗肿瘤药物的潜质,成为治疗癌症的理想候选分子。有些多肽可以通过改变细胞膜的通透性,增加细胞对传统抗癌药物的摄取,从而提高癌细胞对抗癌药物的敏感性。凋亡诱导肽D（KLAKLAK）2,全部由D型氨基酸组成,以下简称为KLA。KLA是一类能够诱导细胞凋亡的抗癌肽,但其进入细胞内部的能力偏弱,所以对其进行化学修饰及改造以提高癌细胞的摄取率是提高其抗癌活性的重要环节。在前期工作中,我们将KLA与细胞穿透肽TAT共价偶连成杂合肽KLA-TAT,实验结果证实,两种多肽偶联后使得两个不具备破膜能力的多肽转化成膜活性肽,赋予了多肽新的属性。形成的膜活性肽可以通过破膜和网格蛋白依赖的胞吞两种途径穿过细胞膜进入细胞内部,同时,体外抗癌活性较KLA提高了24倍。在本课题中,我们对比研究了不同位置修饰获得的杂合肽KLA-TAT与TAT-KLA的抗癌活性,然后以多肽和临床常用化疗药物为研究对象,以肝癌细胞为模型,研究其联合用药的抗癌活性和作用机制。首先,通过Fmoc固相合成法合成杂合肽KLA-TAT与TAT-KLA,并用高效液相色谱进行纯化制备,得到纯肽纯度达到95%以上,质谱确认为目标多肽;其次,通过MTT筛选实验和流式细胞术检测KLA-TAT和TAT-KLA对癌细胞增殖活性的影响;最终优选多肽TAT-KLA与紫杉醇组合,以肝癌HepG2细胞为模型进行联合用药研究。实验结果证实,两种药物联合用药大大提高了对HepG2细胞的杀伤效果,并且两种药物表现出明显的协同效果。进一步通过流式细胞术、荧光显微镜、Western Blotting等研究也证实,TAT-KLA与紫杉醇通过破膜方式进入细胞,并通过线粒体途径诱导细胞凋亡来实现其抗癌疗效。TAT-KLA与紫杉醇的联合用药不仅能有效克服肿瘤细胞对紫杉醇的耐受,也减少紫杉醇的毒副作用,这种共价偶联修饰并与紫杉醇共给药的策略为临床用药提供有价值的理论支持。