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研究背景及目的索拉非尼可以明显改善肾癌患者的总体预后,尤其是无瘤进展期的延长,但是仍有大约有20%的患者在早期用药时表现为无效甚至为肿瘤进展,这在很大程度上影响了索拉非尼的使用和临床效果。然而,关于肾癌索拉非尼耐药的具体机制目前尚不清楚。除此之外,肾癌索拉非尼治疗缺乏明确的标志物。近年来研究发现长链非编码RNA在很多生物学机制上发挥着重要作用,最近有研究提出它在肿瘤的药物耐药中发挥着重要作用,并有可能成为肿瘤药物治疗的分子标志物。然而,长链非编码RNA在肾癌索拉非尼耐药中的作用和机制缺乏相关的报道。因此,我们以此为契机,探索长链非编码RNA在肾癌索拉非尼耐药中的作用以及寻找耐药的相关分子标志物,为肾癌索拉非尼治疗提供理论基础。研究方法1)选取临床索拉非尼耐药和敏感的标本进行RNA芯片分析,并跟据差异倍数、P值,筛选出有意义的长链非编码RNA。2)扩大临床样本对筛选的长链非编码RNA进行验证。选取成熟的肾癌细胞系,根据索拉非尼敏感性,进行进一步验证,筛选出差异最明显的长链非编码RNA。3)对筛选的长链非编码RNA进行干扰或过表达,观察肾癌细胞系对索拉非尼敏感性的变化。4)将过表达长链非编码RNA的细胞系荷瘤到小鼠皮下,观察移植瘤对索拉非尼的敏感性变化。5)筛选长链非编码RNA下游的受体酪氨酸激酶通路,寻找下游靶点。加减法实验确定下游靶点在长链非编码RNA影响肾癌索拉非尼耐药中的作用。6)临床样本中验证长链非编码RNA与肾癌索拉非尼疗效的相关性。研究结果1)成功筛选出肾癌索拉非尼耐药相关的长链非编码RNA,命名为lncRNA-SRLR(sorafenib resistance associated lncRNA in renal cell carcinoma)。发现其在扩大的临床样本中以及相对耐药的肾癌细胞系中均高表达。2)下调lncRNA-SRLR可以增加索拉非尼对肾癌细胞系的杀伤作用,上调lncRNA-SRLR则可以使肾癌细胞系对索拉非尼的耐药性增加,同样在小鼠体内实验中证实了上调lncRNA-SRLR可以使移植瘤对索拉非尼反应性减弱。3)lncRNA-SRLR通过激活STAT3进而促进肾癌细胞系索拉非尼耐药。lncRNA-SRLR通过与NF-κB结合促进其与IL-6启动子区结合,促进IL-6转录进而激活STAT3。4)联合IL-6或STAT3抑制剂可以明显增加索拉非尼对肾癌细胞系的抑制作用。5)临床样本中发现,lncRNA-SRLR和IL-6在肾癌组织中的表达有一定的相关性,而且低表达lncRNA-SRLR或IL-6的患者对索拉非尼更敏感。结论lncRNA-SRLR通过影响NF-κB/IL-6/STAT3通路活性进而促进肾癌索拉非尼耐药。低表达lncRNA-SRLR的肾癌病人对索拉非尼有更好的反应性。因此,lncRNA-SRLR有可能作为肾癌索拉非尼治疗新的标志物或靶点。