研究目的通过观察DON毒素和“DON+T-2”毒素对大鼠肝脏CYP2E1酶含量和活性的影响及其对肝脏、肾脏、食管和肠道等组织器官的损伤作用,探讨真菌毒素在生物体内的代谢途径和特征。研究方法选取4周龄Wistar大鼠幼鼠30只,按照完全随机化方法分为DON毒素组、“DON+T-2”组、空白组。染毒方式为模拟自然进食状态,将毒素掺入饲料中,DON组毒素含量为0.33μg/g,“DON+T-2”组为DON毒素为0.22μg/g,T-2毒素为0.1μg/g,空白组食用等量的常规固体颗粒饲料。对幼鼠分两个阶段喂养,分别为15天和30天,将大鼠处死后,取其肝脏,制备肝微粒体,通过酶联免疫吸附剂测定法(ELISA法)对大鼠肝微粒体CYP2E1酶含量及活性进行检测。剖解大鼠,分别取肝脏、肾脏、肠、食管等组织器官,制作石蜡切片,采用HE染色法进行染色。实验数据通过采用SPSS 20.0的统计软件包来做统计分析。实验数据用算术均数及标准差((?)±s)表示,采用线性回归的统计方法,对DON毒素组和空白对照组之间采用t检验的方法进行两组之间的比较;DON毒素组、“DON+T-2”组和空白对照组之间采用单因素方差分析的方法进行比较;进一步比较DON毒素组、“DON+T-2”组和空白对照组两两之间是否存在统计学意义,采用LSD检验法;按P≤0.05有统计学意义作为检验水准。研究结果1.临床症状空白对照组大鼠的一般生活状况较好,并未出现呕吐等其他症状。DON毒素组和“DON+T-2”组大鼠采食量下降,体重减轻,活动度减少,被毛不整,喜趴卧,运动失调,反应迟钝,粪便稀稠等症状。2.CYP2E1酶含量检测结果染毒15天后,空白对照组CYP2E1含量为6.052±0.124(ng/ml),DON组为3.595±0.152(ng/ml)。染毒30天后,空白对照组CYP2E1含量为4.511±0.137(ng/ml),DON组为2.936±0.093(ng/ml),联合组为2.484±0.149(ng/ml)。3.CYP2E1酶活性检测结果染毒30天后,空白对照组CYP2E1活性为3.541±0.070(U/ml),DON组为3.318±0.047(U/ml),“DON+T-2”毒素组为3.229±0.016(U/ml)。4.组织病理学变化对大鼠进行剖检后发现,DON毒素组大鼠肾脏出现肿大现象,而且有大小不一的白色坏死灶出现在肝脏的表面,空白对照组大鼠脏器并未发现明显变化。组织病理变化正常空白组大鼠肝血窦排列正常,肝细胞结构完好,细胞核大而圆,组织结构正常,核仁明显,胞质丰富,多呈现嗜碱性;DON毒素组光镜下可见大量的肝细胞细胞质浅染,胞浆内出现粉红色物质;“DON+T-2”毒素组肝细胞出现局灶性水肿、坏死,并可见部分肝细胞核固缩、深染,有炎性细胞浸润出现在血管周围,并可见血管套现象,胞浆内出现不规则空泡。空白对照组肾脏,在视野中可见肾小球结构正常,肾小管上皮细胞核呈圆形,位于细胞的基底部,整齐排列,没有出现明显的病理变化;DON毒素组肾视野中能看到蛋白管型,部分肾小管管腔内可见粉红色蛋白黏液渗出;“DON+T-2”毒素组肾视野中可见蛋白管型,部分肾小管管腔内有粉红色蛋白黏液渗出,部分肾小球囊腔内也可看到粉红色蛋白滴液。空白对照组食管未见明显的病理变化;DON毒素组视野中可见食管上皮出现角化过度,角质层变厚,而且有鳞状上皮化生;“DON+T-2”毒素组可见食管上皮角化过度,角质层增厚,食管壁增厚,有明显的鳞状上皮增生。空白对照组大鼠肠道没有明显变化;DON毒素组视野中出现了肠黏膜下层的水肿,间隙增大,部分肠腺上皮细胞也出现水肿;“DON+T-2”毒素组可见肠黏膜固有层水肿,细胞间隙增大,部分肠黏膜上皮细胞坏死脱落。结论1.进行染毒15天后,与空白对照组大鼠相比,DON毒素组可导致大鼠体内肝CYP2E1酶含量的下降。结果说明DON毒素对肝细胞产生毒性效应,使肝脏产生损伤作用,肝脏代谢功能减弱,肝代谢酶受损,表现为CYP2E1酶含量的降低。2.进行染毒30天后,与空白对照组大鼠相比,DON毒素组大鼠体内肝CYP2E1酶含量及活性下降;“DON+T-2”毒素组CYP2E1酶含量及活性明显下降。与DON毒素组相比,“DON+T-2”毒素组CYP2E1酶含量及活性出现一定程度的下降。结果说明DON毒素对肝细胞的毒性作用,使肝脏产生了损伤,肝脏代谢功能减弱,肝代谢酶受损,表现为CYP2E1酶含量及活性的降低。“DON+T-2”毒素组CYP2E1酶含量及活性比DON毒素组有所下降,可能是DON毒素和T-2毒素产生了协同作用或相加作用,增大了对肝脏的损伤作用。3.组织病理学显示,与对照组肝脏相比,DON毒素组视野中可见大量的肝细胞质浅染,胞浆内可见粉红色物质;“DON+T-2”毒素组肝细胞局灶性水肿坏死,并可见部分肝细胞核固缩、深染,炎性细胞浸润在血管周围,并可见血管套现象,胞浆内可见不规则空泡。与对照组肾脏相比,DON毒素组和“DON+T-2”毒素组视野中可看到蛋白管型,部分肾小管管腔内有粉红色蛋白黏液渗出;“DON+T-2”毒素组还可看到部分肾小球囊腔内出现粉红色蛋白滴液。与空白对照组相比,DON毒素组和“DON+T-2”毒素组视野中可见食管上皮角化过度,角质层变厚,食管壁增厚,而且有鳞状上皮增生,“DON+T-2”毒素组鳞状上皮增生明显。与空白对照组相比,DON毒素组和“DON+T-2”毒素组视野中出现肠黏膜下层水肿,间隙变大,部分肠腺上皮细胞发生水肿。此外,“DON+T-2”毒素组可看到部分肠黏膜上皮细胞出现坏死脱落现象。