奶牛亚急性瘤胃酸中毒是奶牛特别是高产奶牛的常见疾病,也是造成当今世界奶牛业巨大损失的疾病之一。随着病情的发展慢性瘤胃酸中毒产生的脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)会随着血液循环到达乳腺组织或其它器官引发乳腺炎等疾病。NF-κB信号转导通路是LPS所介导的信号转导通路中最重要的下游通路,在天然免疫反应中起着极为重要的作用,现已经成为国内外学者的研究热点。激活的转录因子NF-KB,能够增强炎性细胞因子表达。本研究旨在以小鼠为实验模型,通过体外及体内实验,研究LPS对小鼠乳腺组织中NF-κB、ACCα和β-Casein mRNA表达的影响,为相关的研究提供依据。1血液中LPS对小鼠肝脏和乳腺中功能基因表达的影响选取40只雌性ICR小鼠,受孕后随机分为试验组和对照组。在雌鼠生产第10～11天,试验组经尾静脉注射10μg/mL LPS0.2mL;对照组灌注0.2mL生理盐水,分别于灌注后3h、6h、12h、24h采集样本。眼静脉采血用于白细胞总数和白细胞分类计数的分析,部分肝脏和乳腺组织做石蜡切片,HE染色进行组织学观察；部分肝脏和乳腺组织提取总RNA,采用RT-PCR法,检测各组乳腺组织中NF-κB. ACCa和β-Casein mRNA表达。组织学结果表明肝脏在注射后肝中央静脉扩张,肝窦充血,6h和24h有大量炎性细胞浸润,乳腺在注射后3h有炎性细胞浸润,6h腺泡腔内有大量炎性细胞浸润,24h腺泡结构崩解；血液中白细胞总数增加,中性粒细胞在各类白细胞中所占的百分比升高；各组中NF-κB、ACCa和和β-Casein mRNA表达水平与对照组比较的分析结果表明,注射LPS能够增强肝脏中NF-κB mRNA表达,降低乳腺的ACCα和β-Casein mRNA表达。肝脏中NF-κB mRNA表达在3h时显著升高而后呈下降的趋势,这种现象提示了这可能是一个急性的炎症反应。2LPS对小鼠乳腺组织中NF-κB、ACCa和β-Casein mRNA表达的影响选取30只雌性ICR小鼠,受孕后随机分为试验组和对照组。在雌鼠生产第10-11天,试验组经第四对乳头分别灌注0.1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL LPS0.1mL;对照组灌注0.1mL生理盐水,于灌注后6h采集样本,部分乳腺组织做石蜡切片,HE染色进行组织学观察；部分乳腺提取总IRNA,采用RT-PCR法,检测各组乳腺组织中NF-κB、ACCa和β-Casein mRNA表达。组织学结果表明随着灌注浓度的增大炎性细胞数量逐渐增多；各组NF-κB、ACCa和和β-Casein mRNA表达水平进行分析表明灌注LPS能够显著增强NF-κB mRNA表达,降低ACCa和β-Casein mRNA表达,试验组NF-κB mRNA表达除0.lμg/mL组与对照组相比差异不显著外其余各组NF-κB mRNA表达极显著高于对照组(P<0.01); ACCa和和β-Casein mRNA表达极显著低于对照组(P<0.01)。3LPS对小鼠乳腺上皮细胞中NF-κB. ACCa和和β-Casein mRNA表达的影响取妊娠14～19天的ICR小鼠第四对乳腺,用胶原酶消化法进行原代乳腺上皮细胞培养。观察细胞形态,用MTT法绘制生长曲线确定细胞的对数生长期。培养原代乳腺上皮细胞,当处于对数生长期的细胞融合至80%～90%时,吸去培养基,用PBS洗两次,将细胞分为五个试验组和一个对照组,每组三个重复孔,试验组加入2mL LPS (0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、μg/mL.5μg/mL);对照组加入2mL DMEM培养液,放入培养箱,于6h后收集细胞提取RNA,采用RT-PCR法检测各组的NF-κB、 ACCa和和β-Casein mRNA表达水平,试验重复三次。PCR扩增结果表明LPS刺激后能显著增强NF-κB mRNA表达,降低ACCa和β-Casein mRNA表达,试验组中0.05μg/mL组、1μg/mL组、5μg/mL组NF-κB mRNA表达极显著高于对照组(P<0.01),0.1μg/mL与对照组差异不显著；ACCa和P-Casein mRNA表达极显著低于对照组(P<0.01),但ACCa mRNA的表达仍有一个先升高后降低的过程。