小鼠胚胎冷冻的研究

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随着生命科学的发展,作为研究生命科学基础条件之一的实验动物也在我国得到长足的发展。目前,全世界仅实验小鼠、遗传工程小鼠的品种、品系就有6000多种,并且每年以600—800种的速度在增加,我国为了与世界生命科学接轨,现正建设《国家遗传工程小鼠资源库》,引进和开发这些珍贵的实验动物,为了使这些珍贵的实验动物品种得以安全的保存,建立一种快速、经济、可靠的小鼠种质保存方法尤为重要。而胚胎冷冻保种技术是目前小鼠保种技术中最为成功的一项技术。 本文以EG40、ES40、EFS40为冷冻液,采用快速冷冻法、玻璃化冷冻法,用ICR小鼠对小鼠胚胎冷冻的条件进行了系统的探索,除用冷冻麦管进行冷冻外,首次用细胞冷冻管进行胚胎冷冻。EG40、ES40冷冻液进行胚胎快速冷冻,解冻后胚胎囊胚发育率可达56.4%、66.7%,胚胎移植着床率为41.4%、50%;用EFS40为冷冻液的进行玻璃化冷冻,解冻后囊胚发育率达87.2%,着床率为66.3%,与对照组差异不明显。用EFS40玻璃化冷冻液并用细胞冷冻管代替麦管进行胚胎冷冻,其结果与麦管法无差异。作者对一步法和二步法冷冻方法进行了比较,EG40、ES40冷冻液二步法冷冻效果比一步法好,差异显著;而EFS40玻璃化冷冻液二步法冷冻效果与一步法相比无差异。在此基础上,用冷冻麦管、细胞冷冻管分别采用一步法、二步法对Lats基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻,胚胎解冻后,囊胚发育率分别为:90%、90.1%、89.2%、91.4%;移植后着床率分别:50.0%、47.1%、43.4%、46.5%,差异不显著;并且与对照组相比差异也不显著。而且通过基因检测,冷冻后代Lats基因未发生丢失。 因此以ES40、EFS40冷冻液的胚胎快速冷冻法和玻璃化冷冻法与EG40冷冻液相比,更具有应用价值,尤其是用细胞冷冻管进行玻璃化冷冻,方法朱孝荣:小鼠胚胎冷冻的研究更简单、实用,而且冷冻效果理想。
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