【摘 要】
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根据GenBank中已经发表的羊传染性脓疱病毒毒株NZ2株的VIR基因序列,设计合成1对引物。采用PCR技术对内蒙古分离株OV/nm-05的VIR基因进行特异性扩增,然后将其克隆到pEASY-T1载
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根据GenBank中已经发表的羊传染性脓疱病毒毒株NZ2株的VIR基因序列,设计合成1对引物。采用PCR技术对内蒙古分离株OV/nm-05的VIR基因进行特异性扩增,然后将其克隆到pEASY-T1载体中。将经过PCR鉴定和酶切鉴定后的阳性重组质粒进行测序,得到大小为779bp的核苷酸片段,其中完整的VIR基因长为552bp。序列分析表明,OV/nm-05株与1710/03株同源性最高,达98.0%,与513/04株的同源性最低,为95.4%,与其他8株参考毒株的同源性都在95.5%以上,说明羊传染性脓疱病毒各株之间VIR基因的差异不大。用上述引物进行PCR退火温度的优化。采用该PCR方法对OV/nm-05株、犊牛睾丸细胞和山羊痘病毒GVX/nm株的DNA进行PCR扩增,结果只有OV/nm-05株能扩增出相应的片段,其余均为阴性,说明该PCR反应体系具有良好的特异性；对OV/nm-05株的DNA模板10倍梯度稀释后进行PCR扩增,结果最低可检测出38pg的模板,说明该PCR反应体系具有较高的敏感性。
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