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四君子汤是中医学“益气健脾”治则和治疗“脾虚证”的经典方和代表方。先前的研究表明:四君子汤对消化系统和免疫系统的功能具有调节作用,“脾虚证”主要表现为消化系统功能的减退和紊乱、免疫功能改变等,四君子汤可部分逆转这些变化。肠道粘膜免疫系统是消化系统和免疫系统的重要组成部分,脾虚的病机和临床表现与肠道粘膜免疫受损的某些病证,如溃疡性结肠炎、炎症性肠病等的表现有相似之处,两者关系密切。多糖是一类具有重要生物活性的物质,具有免疫活性,对肠道粘膜免疫系统功能也有影响。四君子汤中党参、白术、茯苓和甘草均含有丰富的多糖,而且粘膜上皮细胞表面的很多细胞膜分子为糖或糖基化合物,多掂有可能通过与肠道上皮细胞的这些分子相互作用而发挥效应。据此,作者提出的科学假设为:四君子汤总多糖在四君子汤复方药物活性的发挥中起重要作用,它有可能通过对小肠上皮细胞功能的影响而发挥对肠道粘膜吸收和免疫功能的调整作用,目前尚未见有这方面的研究报道。 围绕上述研究目的,本文以大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞为研究对象开展了以下几方面的研究工作,即:四君子汤总多糖及各单味药多糖对IEC-6细胞增殖、细胞迁移、细胞粘附以及对其基因表达谱的影响,主要结果如下: 1.四君子汤总多糖及各单味药多搪对IEC-6细胞增殖的影响 采用MTT法以及细胞计数法表明,四君子汤复方总多糖去蛋白成分PPS以及未去蛋白成分 PS对大鼠小肠卜灾细胞株 1[C-6细胞的生长均具有明显的促进作用,其中去蛋白成分PPS对I[C-6纠l胞数量的增加烂势较未去蛋白成分m为奸,持续观察四君于汤总多糖与门。C-6纠1胞孵有不同时问叶其生长的影响,结果表明PPS不同剂量组于不同的培养时问对KC-6细胞的生长均有促进作用,但以PnS200pg加 与细胞孵行1天和以n‘」m(小g。ml与细胞孵育2天作用足著,提示*‘x对IEC-6细胞生长的促进作用可能具有一定的时效关系c当采旧消炎痛造成IEC-6细胞生长抑制的模型时,四君于二勿总多糖可使其恢复至小常水平。观察了四君于汤中各单味药多糖及总多糖 X+I[C-6细胞的增佰的影响,结果表明各多糖的作用存在差异,沃警多糖具有明显的促进细胞上长的作用,h草多搪与党参多糖的作用不显著,而白术多糖则具有明巳的抑制细胞生h的作川c当采用每两味多糖组合时,即以党参加白术,党参加议筝,党参加甘草,白术加伏各,白术加甘草,庆菩加甘草为两两组合,观察组合后的多糖与总多糖的作用差异,结果衣明,所有两两组合的多糖作用强度远个如四君人为总多糖,提示四君子汤总多糖的作用可能是各种单味药多糖综合作用的结果,也提示中药复方用药可能具有一定的合理性。2.四君子汤总多糖及各种单味药多糖对压-6细胞迁移的影响 采用一单面刀片在 6孔细胞培养板中央刮除约 27In。X 10mm面积的细胞,造成细胞损伤后细胞修复和细胞迁移模型。观察四君下汤总多糖对 IEC十细胞迁移的作用。实验结果表明四君于二勿。匕多糖士蛋白成分1个S及未去蛋白成分卜S对IEC-6细胞迁移均具有明显的促进作闺,无沦是在细胞刮除后圳l、,或片Zlhl。时,与干常时照组相比差异均女同著意义;进一少皿架不向剂量I个S 付 uC-6细胞迁移的影响,结果表明四X于汤总多搪以100pgil川-100p9’1ill为促进纠* 辽移的最佳剂量;观察四君于汤总多糖在细1地刮除叭持续给药4大(们当于硕防川药)、以及在细胞刮除汕及刮除R体续用药(怕当十颅防爿。治疗用药)对1【-6细胞修臭迁移的影响,都具有明显的促进受损细胞迁移的作用。提示四君于汤何可能通过某些讥制影响小肠上皮细胞的迁移活动,从而激活上皮细胞的功能。 四君了汤中各单味药多糖{I EC-6细胞的迁移作用存在差异。细胞刮除当时给药可见党参多糖、付草多糖村1n-6细胞的迁移只有促进作用,白术多糖对细胞迁移无明显影啊,侠学多糖则松见出明显的抑制细胞迁移的作用;细胞刮除汕持续给药I天可见党参多糖与付草多糖仍保持促进细胞迁移的作用,而白术多糖与获菩多糖则表现出轻微的抑制细胞迁移的作用,但二肯的起效时问不同,白术多糖主要为细胞刮除后24小时出现抑制作用,而沃多多糖则在细胞刮除后8 ’h 互且时出现抑制作用。与各单味药多糖用比,四君于汤总多糖无论在细胞刮除即时给药,或者于细胞刮除的持续给药,对大鼠1r-6的细胞迁移作用都具有明显的优势,实验结果表明四君于汤总多糖的作用明显忧于各单味药多糖。:Z.四君于汤总多糖对N工-6细胞粘附功能的影呐 门工-6细胞接种于6孔袄L,1&人换培养液 次,-于细胞栓种后第5人进汀消化计数,再次离心后,细胞以对照组培养液,含DF*)的培养液,以及含DF\10+四君子汤总多糖的培养液重悬,调整细胞密度到 SX 10‘/’d。这些细胞悬液在培养箱中放置一定时问后接种到6孔培养板卜,在规定的时问采用倒置显微镜上装有的数码相机进行拍摄,观粱阶\们及四君于汤总