褪黑素受体在青少年特发性脊柱侧凸患者软骨细胞中的表达及其通路的研究

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第一部分:人软骨细胞中褪黑素受体mRNA的表达及其意义   目的:检测人软骨细胞中是否存在褪黑素受体mRNA的表达,并探讨其意义   方法:取8例手术切除的人髂软骨组织进行软骨细胞培养,并用二型胶原免疫组化对培养的细胞进行软骨细胞鉴定。取二代软骨细胞抽提总RNA,用逆转录酶,聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测褪黑素受体mRNA的表达   结果:人软骨细胞中总RNA以MTNR1A和MTNR1B两种受体引物进行的RT-PCR,产物电泳呈阳性条带,其基因片段长度与MTNR1A和MTNR1B受体引物之间的核酸长度相当   结论:人软骨细胞中存在MTNR1A、MINR1B两种褪黑素受体mRNA的表达,证明了软骨细胞是褪黑素作用的靶细胞,褪黑素可能通过存在于软骨细胞中的MTNR1A、MTNR1B受体来调节骨骼的生长发育   第二部分:青少年特发性脊柱侧凸患者软骨细胞中褪黑素受体mRNA的表达差异的研究   目的:研究特发性脊柱侧凸患者软骨细胞中褪黑素受体含量的变化,并探讨其与特发性脊柱侧凸病因学的关系。   方法:本研究分为2组:特发性脊柱侧凸组:22例,年龄10-16岁(平均12.7岁),平均Cobb角60.1°。对照组:8例非脊柱侧凸病例作为对照,年龄10-15岁(平均12.9岁)。通过对手术切除的人髂软骨和棘突软骨组织进行软骨细胞培养,取二代细胞抽提总RNA,采用RT--PCR方法检测所有病例软骨细胞中褪黑素受体两种亚型MTNR1A、MTNR1B mRNA的表达量。   结果:同一患者MTNR1A、MTNR1B mRNA在髂软骨和棘突软骨细胞中的表达无显著差异(P>0.05),特发性脊柱侧凸组中软骨细胞中MTNR1A、MTNR1BmRNA的表达量均显著低于对照组(P<0.05)   结论:特发性脊柱侧凸患者软骨细胞中MTNR1A、MTNR1B受体mRNA的表达均存在异常,这可能与特发性脊柱侧凸的发生发展有关。   第三部分:青少年特发性脊柱侧凸患者软骨细胞褪黑素信号通路的初步研究   目的:研究青少年特发性脊柱侧凸患者软骨细胞中褪黑素信号通路是否存在异常。   方法:本研究分为2组:特发性脊柱侧凸组:7例,年龄10-15岁(平均13.1岁),平均Cobb角58.3°。对照组:7例非脊柱侧凸病例作为对照,年龄10-15岁(平均12.5岁)。通过对手术切除的人髂软骨组织进行软骨细胞培养,并用二型胶原免疫组化对培养的细胞进行软骨细胞鉴定。取三代细胞,先采用福斯科林刺激软骨细胞内cAMP升高,然后用不同浓度褪黑素刺激细胞,检测细胞内cAMP的水平。   结果:AIS组和对照组软骨细胞cAMP的基础水平都很低,在给予福斯科林刺激以后,cAMP的水平明显升高,此后再给予生理剂量的褪黑素刺激后,两组cAMP水平的抑制程度无明显差异(p>0.05);给予药理剂量的褪黑素刺激后,两组cAMP水平的抑制程度同样无明显差异(p>0.05)。   结论:AIS患者软骨细胞中褪黑素信号通路可能不存在异常。
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