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水稻细菌性条斑病,简称细条病(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xooc),是我国南方稻区的主要病害之一。轻发田一般减产15%~25%,严重的可达40%~60%。因而明确水稻细条病病原菌致病性和水稻抗性遗传机理及其相互作用的分子基础,从本质上阐明由病原菌诱导的抗性基因表达与调控的分子生态学机理,对于有效控制水稻细条病的发生与发展、减少经济损失具有重要的理论和现实意义。 本研究以高抗细条病的水稻品种佳辐占成熟胚的愈伤组织为材料,用南方稻区强毒力细条病菌菌株进行人工接种,通过DDRT-PCR技术,共找到60个大小在179bp-700bp之间受Xooc侵染诱导或抑制表达的cDNA差异片段。其中50个差异片段为接种Xooc的水稻愈伤组织所特有的,另外10个为未接种Xooc的水稻愈伤组织所特有的。回收这些cDNA差异片段后进行二次扩增,并采用RDB(reverse dot-blotting)杂交进行阳性鉴定,结果得到4个阳性克隆。通过BLAST软件将这4个阳性克隆同基因文库中的序列进行同源性比对,发现24-21克隆位于水稻第10号染色体的nbeb0039C14克隆(GenBank Acc:AC087549)上;39-34克隆位于水稻第5染色体的BAC克隆OSJNBb0086G17(GenBank Acc:AC144455)上;45-11克隆位于水稻第1染色体的PAC克隆P0410E03(GenBank Acc:AP002844)上;55-34克隆位于水稻第10染色体的OSJNBa0060A14克隆(GenBank Acc:AC021893)上。 通过与表达库(EST)中的序列同源性比对结果表明,24-21克隆与NaCl胁迫的水稻根系cDNA克隆ID1561(GenBank Acc:BE607423)同源性达97%,且E期望值达3e-82,还与野蚕(Bombyx mandarina)的cDNA克隆H109(GenBank Acc:AT001109)具9%的同源性。39-34克隆包含一个小粒稻(Oryza minuta)HybriZAP-2.1 XR库的cDNA克隆OML00455(GenBank Acc:CB210175),并与稻瘟病菌(M.grisea)诱导的水稻cDNA克隆OSJNEb09A05(GenBank Acc:CB646488)和OSJNEb09B24(GenBank Acc:CB646568)、水稻花期穗的cDNA克隆E2428(GenBank Acc:AU094102)、短日照条件下水稻幼叶的cDNA克隆E60992(GenBank Acc:AU095268)以及NaCl胁迫水稻根系的cDNA克隆BR030002000_PLATE_E11_85_086.abl(GenBank Acc:CA754595)部分同源。45-11克隆与浸水胁迫大麦根的cDNA克隆EBro03_SQ005_D03(GenBank 福建农林大学硕士学位论文^ec:BQ763644)、大麦授粉ld后幼胚的eDNA克隆so00020003oA08FI(GenBankAee:月434386)‘、稻瘟病菌诱导获得的水稻eDNA克隆VoolA03(GenBankAee:BM42 1 151)和水稻细条病菌(BLS222)诱导的玉米叶片的eDNA克隆Rxo一2Bos (GenBank Aee:eA452438)以及九eeinia 50烤儿1 isolate州l诱导的玉米叶片eDN^克隆RP3A一2少03(GenBank Aee:CA452784)等具有42一420bp大小不等的同源性。55一34克隆与浸水大麦根的。DNA克隆EBroo3sQoo妇17(GenBank Aee:BQ765947)、高粱胚(EMI)的eDNA克隆EMI52一05.91AooZ(GenBank Aee:BG464036)、禾谷镰抱菌(尸脚minearum)诱导的小麦 eDNA克隆Tao屯13908(GenBank Aee:BQgol614)、白粉病菌(丑脚min心£sP沉tici)诱导的小麦eDNA克隆wlmo,pk041.o7(GenBankAcc:cA658271)等具有较高的同源性,且与一个水稻花期穗的cDNA克隆Eos 16(GenBank Ae。:^ul72440)具有417bP大小的同源。 从推定的氨基酸序列的同源性比对分析发现,24一21克隆的氨基酸序列是一个新的序列;39一34克隆的氨基酸序列除了与ATI基因(h。。k一coniaining protein ATI)(GenBank Acc:557459)有34个氨基酸的同源外,还与金黄色葡萄球菌(及叩勺lococ二auras)的转移复合蛋白(transfer eomPlex nrotein TrsE)(GenBank Aee:F36891)、NADH脱氢酶亚基(dehydrogenase sub画t)4[Che之rogaleus oedius](GenBank Aee:AAK705 14)等有一定的同源性;而45一11克隆的氨基酸序列则仅与PDR一like ABC transPorter团。夕之口sarivaC即onica eultivar一gro即)」(GenBank Aee:CAD59568)具有同源。55一34克隆的氨基酸序列与推定的水稻果胶甲基醋酶(Putative pectin methylesterase)(GenBank Acc:AAK98683)具有73个氨基酸的同源性,且同源性(Identities)和正确性(Positives)均为98%,还与拟南芥假定的蛋白(GenBank Acc:H 86187)和推定的花粉特异果胶酷酶(pollen一speeifle peetinesterase,putative)(GenBank Aee:Np191776)等具有较高的同源性。文中还就如何应用现有分离得到的相关基因进一步开展抗性生理与分子生态学研究作了探讨。