【摘 要】
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核糖体失活蛋白（ribosome-inactivating protein，RIP）是一类广泛存在于植物界中的毒蛋白，具有独特的酶学机制和生物学功能。目前报道的RIP大多来自高等植物，在食用菌中也有一些发现。本实验运用多种蛋白质纯化技术，成功地从黑木耳菌丝体中分离得到RIP，并对其性质和活性进行鉴定。分别通过纤维素DE-52阴离子交换层析、Affi-gel blue亲合层析、Sephadex G-
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核糖体失活蛋白（ribosome-inactivating protein，RIP）是一类广泛存在于植物界中的毒蛋白，具有独特的酶学机制和生物学功能。目前报道的RIP大多来自高等植物，在食用菌中也有一些发现。本实验运用多种蛋白质纯化技术，成功地从黑木耳菌丝体中分离得到RIP，并对其性质和活性进行鉴定。分别通过纤维素DE-52阴离子交换层析、Affi-gel blue亲合层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析三种层析方法逐步纯化RIP，在每步纯化之后，用紫外测定法、SDS-PAGE电泳法和家兔网织红细胞裂解液体外翻译等方法对所得蛋白的含量、分子量及对蛋白质体外合成抑制活性进行测定，将有抑制作用活性的目的蛋白混合物继续纯化，最终分离得到高纯度的黑木耳核糖体失活蛋白G2。高效液相色谱检测其纯度达99.3％。然后对此RIP进行RNAN-糖苷酶活性检测和抑制蛋白质体外翻译合成活性检测，二者均呈阳性反应，从而证明G2为黑木耳核糖体失活蛋白，是一种新发现的蛋白，为真菌蛋白质库增加一种新资源，为RIP的开发与利用提供一种新材料，为进一步克隆该核糖体失活蛋白基因作了良好前期研究工作。
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