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第一部分ARRDC3与子痫前期相关性的研究目的1.研究子痫前期胎盘组织中ARRDC3表达情况及缺氧对滋养细胞ARRDC3表达的影响。2.研究缺氧条件下ARRDC3表达对滋养细胞侵袭及血管形成的影响。方法1.利用生物信息学方法分析四组子痫前期表达谱基因芯片中的差异表达基因,从差异表达基因中挑选出与缺氧代谢、细胞侵袭及血管形成相关的基因——ARRDC3。2.免疫组化检测10例子痫前期胎盘组织样本和10例正常胎盘组织样本中ARRDC3表达分布,Western Blot检测10例子痫前期胎盘组织样本和10例正常胎盘组织样本中ARRDC3蛋白的表达。3.建立绒毛外滋养细胞系HTR8/SVneo细胞体外缺氧模型,Western Blot检测缺氧对HTR8/SVneo细胞ARRDC3蛋白的表达的影响、EDU增殖实验检测缺氧对HTR8/SVneo细胞增殖的影响、Transwell小室法检测缺氧对HTR8/SVneo细胞侵袭能力的影响、Tube formation法检测缺氧对HTR8/SVneo细胞血管形成能力的影响、流式细胞凋亡实验检测法检测缺氧对HTR8/SVneo细胞凋亡的影响。4.构建ARRDC3重组质粒,用lipo2000转染HTR8/SVneo细胞,Western Blot检测ARRDC3过表达效率,EDU增殖实验检测ARRDC3过表达对HTR8/SVneo细胞增殖的影响、Transwell小室法检测ARRDC3过表达对HTR8/SVneo细胞侵袭能力的影响、Tube formation法检测ARRDC3过表达对HTR8/SVneo细胞血管形成能力的影响、流式细胞凋亡实验检测法检测ARRDC3过表达对HTR8/SVneo细胞凋亡的影响。5.构建 ARRDC3 特异性 siRNA,用 lipo2000 转染 HTR8/SVneo 细胞,Western Blot检测ARRDC3沉默效率,Transwell小室法检测ARRDC3沉默对HTR8/SVneo细胞侵袭能力的影响、Tube formation法检测ARRDC3沉默对HTR8/SVneo细胞血管形成能力的影响、流式细胞凋亡实验检测法检测ARRDC3沉默对HTR8/SVneo细胞凋亡的影响。6.应用HIF-2 α抑制剂处理HTR8/SVneo细胞,Western Blot检测缺氧条件下HIF-2 α 及 ARRDC3 表达。结果1.利用生物信息学分析方法总共鉴定出277个共同的差异表达基因,其中ARRDC3与缺氧代谢、细胞侵袭及血管形成有关。免疫组化检测显示ARRDC3在胎盘组织滋养细胞及血管内皮细胞表达丰富,主要分布于细胞膜。Westren Blot检测显示子痫前期胎盘组织中ARRDC3表达显著高于正常胎盘组织。2.体外绒毛外滋养细胞系HTR8/SVneo细胞缺氧模型中,Westren Blot检测显示缺氧诱导HTR8/SVneo细胞ARRDC3表达,EDU增殖实验检测显示缺氧对HTR8/S Vneo细胞增殖无显著影响、Transwell小室法检测显示缺氧抑制HTR8/SVneo细胞侵袭、Tube formation法检测显示缺氧抑制HTR8/SVneo细胞血管形成、流式细胞凋亡实验检测法检测显示缺氧促进HTR8/SVneo细胞凋亡。3.构建的HTR8/SVneo细胞ARRDC3过表达模型中,Westren Blot检测显示转染ARRDC3过表达质粒HTR8/SVneo细胞中ARRDC3表达相对于对照组提高了(80.08±7.32)%,EDU增殖实验检测显示ARRDC3过表达对HTR8/SVneo细胞增殖无影响、Transwell小室法检测显示ARRDC3过表达抑制HTR8/SVneo细胞侵袭、Tube formation法检测显示ARRDC3过表达抑制HTR8/SVneo细胞血管形成、流式细胞凋亡实验检测法检测显示ARRDC3过表达对HTR8/SVneo细胞凋亡无显著影响。4.构建的HTR8/SVneo细胞ARRDC3沉默模型中,Westren Blot检测显示转染ARRDC3特异性siRNA的HTR8/SVneo细胞中ARRDC3表达相对于对照组下降了(75.12 ± 5.30)%,Transwell小室法检测显示ARRDC3沉默促进HTR8/SVneo细胞侵袭、Tube formation法检测显示ARRDC3沉默促进HTR8/SVneo细胞血管形成。5.用HIF-2 α抑制剂处理HTR8/SVneo细胞后,Westren Blot检测显示缺氧条件下HIF-2 α抑制剂抑制不仅抑制HIF-2 α蛋白表达而且抑制ARRDC3蛋白表达。结论子痫前期胎盘组织中ARRDC3表达显著高于正常胎盘组织。缺氧诱导HTR8/SVneo细胞ARRDC3表达,抑制HTR8/SVneo细胞增殖、侵袭,促进HTR8/SVneo细胞凋亡。ARRDC3的过表达抑制HTR8/SVneo细胞侵袭及血管形成,ARRDC3的沉默促进HTR8/SVneo细胞侵袭及血管形成。缺氧条件下HIF-2 α诱导ARRDC3表达。研究结果揭示了 ARRDC3与子痫前期发病的相关性。第二部分子痫前期与胎盘血管重铸障碍及母体血管因子紊乱的研究进展(综述)子痫前期是一种妊娠相关的特殊疾病,是围产期孕妇及胎儿致病和死亡的主要原因。子痫前期发病机制不明,但胎盘螺旋动脉重铸障碍和血管生成因子及抗血管生成因子的失衡在子痫前期发生发展中起重要作用。母体外周循环血液中血管生成因子及抗血管生成因子可以用于子痫前期发病的预测及子痫前期新疗法的开发。