正性转录延伸因子b（P-TEFb）,由CDK9和CyclinT1组成,能够促进RNA转录延伸和pre-mRNA的加工。为了适应不同的生长环境和转录需求,相当多的P-TEFb被“禁锢”在无活性复合物7SK snRNP中,P-TEFb通过两条信号通路PP2B和PP1 α从7SK snRNP中释放出来与BRD4、AFF1等蛋白形成有转录活性P-TEFb,经由转录机器上的相关蛋白募集到处于暂停状态的Pol Ⅱ上,并对各自的底物进行磷酸化,从而促进转录机器重新启动,转录延伸继续。我们实验室对于P-TEFb从无活性复合物的释放以及有转录活性P-TEFb的募集机制进行了大量的研究,也取得不错的研究成果,但是在释放和募集中间有一个环节有待研究,即有转录活性P-TEFb是如何形成的,以及在哪儿形成。本篇论文主要目的是探究有转录活性P-TEFb形成的场所。为了研究这个问题,我们以HeLa细胞株为模型,建立HMBA诱导转录暂停释放模型,利用质谱、免疫共沉淀、western blot和免疫荧光等技术成功发现并验证了有转录活性P-TEFb各个亚基定位于Nuclear Speckle,在此基础上,我们发现,当Nuclear Speckle被破坏时,有转录活性P-TEFb的形成会受到影响,因此,确定了 Nuclear Speckle是有转录活性P-TEFb形成的场所。紧接着,我们破坏了 Nuclear Speckle,发现P-TEFb无法通过转录机器上的三条募集通道募集到Pol Ⅱ上,转录暂停不能释放,完整的mRNA无法形成,细胞的整体转录水平受到抑制。Nuclear Speckle在表观遗传调控、转录激活和抑制、终止、splicing、3’端加工、mRNA修饰以及mRNA包装和转运等过程中扮演了重要作用。本次研究不仅发现有转录活性P-TEFb形成场所,更是使我们对于Nuclear Speckle在转录过程中所扮演的角色有了新的认识。