黄檗愈伤组织不同培养条件下有效成分含量及抗氧化活性

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黄檗(Phellodendron amurense Rupr.)系芸香科黄檗属植物,是孑遗种,是中国传统中药材关黄柏的基源植物,还是珍贵的用材树种,全身是宝,集保护、药用、经济等价值于一身。一直以来都是研究的热点,由于大量采伐和破坏,野生黄檗资源急剧衰减,现已成国家二级保护树种。一直以来关于黄檗的研究很多,但对黄檗愈伤组织的开发利用鲜有报道,且研究诱导黄檗愈伤组织培养条件的影响和优化以及愈伤组织中生物碱积累和其提取物抗氧化活性的研究,目前尚未报道。本文以黄檗愈伤组织为基础,探究了诱导愈伤的最优培养条件、有效成分积累量及抗氧能力。为保护野生黄檗、解决小檗碱药源供应紧张问题以及其抗氧化功能开发利用提供一些参考。1、通过单因素试验和响应面试验进行分析与设计,研究了诱导黄檗愈伤组织的最优培养条件。针对试验数据的多元回归拟合之后所得回归模型。通过对其模型的各项数据图表分析,且为了方便进行试验,设置最优条件:蔗糖18g/L、含氮量1.ON、6-BA1.4mg/L,在此条件下重复3次试验,最终所得诱导率约为97%。2、利用超声波法和高效液相色谱法对五种不同诱导培养因素下产出的黄檗愈伤组织中生物碱进行提取和测定,探究不同因素对黄檗愈伤组织中的生物碱积累的影响。综合结果,试验发现总体黄檗愈伤组织中小檗碱积累量大于药根碱含量,且掌叶防己碱含量甚少,蔗糖和含氮量对有效成分积累量影响最大。其中光照条件下小檗碱和掌叶防己碱积累量最大,分别约为1.40%和0.18%,而含氮量为2N时,药根碱积累量最大,约为0.81%。在选取因素条件时,为了使愈伤中能够积累较多的次生代谢物时,还应综合考虑此条件下的愈伤组织的生长状态、遗传稳定性、再生能力等。3、使用分光光度计法,以最优条件诱导培养出的黄檗愈伤组织和黄檗树皮为材料,测定了其各自的体外抗氧化活性,包括:DPPH自由基清除能力、铁离子还原能力、ABTS自由基清除能力。通过研究,当溶液体积分数为100%时,黄檗愈伤组织与黄檗树皮的自由基清除率均为90%以上两者几乎相等,且还原能力均较强,具有一定程度的抗氧化能力。
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