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研究背景原发性肝癌是高度恶性的消化道肿瘤之一。2018年,全球范围内肝癌发病率位于恶性肿瘤第六位,癌症相关死亡第四位。原发性肝癌的主要病理类型包括肝细胞癌、肝内胆管癌和混合型。肝细胞癌是最常见的亚型,约占总病例的80%。近些年,研究发现DNA的损伤修复与肿瘤的发生密切相关,哺乳动物不能正确修复DNA损伤会导致各种肿瘤的发生,而DNA损伤修复(DDR)系统异常活化也可促进肿瘤的发生和进展。研究表明,RAD54B作为新型DNA损伤修复蛋白,异常表达于多种恶性肿瘤。我们课题组前期研究发现,RAD54B在肝癌组织中高表达和肝癌患者预后不良正相关,且促进了肝癌细胞增殖和抑制凋亡。然而,RAD54B影响肝癌细胞恶性生物学行为的分子机制仍不清楚。本文拟通过构建RAD54B稳定干扰细胞模型,应用microarray和生物信息学筛选出介导RAD54B肝癌细胞恶性生物学行为的关键分子,并分析出后者可能调控的信号通路。研究方法在肝癌细胞Huh-7和SNU-449中,应用构建的慢病毒干扰载体感染肝癌细胞,构建稳定干扰的肝癌细胞模型。构建成功后,分别应用MTT实验,创伤愈合实验,Transwell实验和流式细胞术检测肝癌细胞敲减RAD54B后对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。在RAD54B稳定干扰的肝癌细胞(Huh-7/shRAD54B)中,通过microarray检测肝癌细胞RAD54B敲减前后的差异表达基因,并进行GO和KEGG富集分析初步筛选出RAD54B调控的关键分子,后应用qRT-PCR和Western Blot对筛选出的关键分子进行验证。应用cDNA/siRNA技术在RAD54B稳定干扰的肝癌细胞中进一步瞬时干预关键分子,通过qRT-PCR和Western Blot验证转染效率并检测对下游信号通路分子表达的影响。使用MTT实验,创伤愈合实验,Transwell实验和流式细胞术检测关键分子干预后对RAD54B稳定干扰肝癌细胞生物学行为的影响。研究结果1、在Huh-7和SNU-449肝癌细胞中,敲减RAD54B可降低肝癌细胞(Huh-7/shRAD54B和SNU-449/shRAD54B)的增殖、迁移和侵袭能力,并促进了肝癌细胞凋亡。2、在Huh-7/shCtrl中Huh-7/shRAD54B细胞中,应用microarray检测和生物信息学分析发现敲减肝癌细胞RAD54B后,DUSP10表达上调,进一步通过qRT-PCR和Western Blot确定DUSP10为RAD54B调控的关键分子。3、RAD54B稳定干扰的肝癌细胞中,通过siRNA技术可有效沉默DUSP10的表达。4、RAD54B稳定干扰的肝癌细胞中,沉默DUSP10的表达,增强了肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,抑制肝癌细胞凋亡。5、RAD54B稳定干扰的肝癌细胞中,沉默DUSP10的表达,影响MAPK信号通路关键分子的磷酸化水平。研究结论RAD54B通过抑制DUP10的表达促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,抑制肝癌细胞凋亡;DUSP10介导RAD54B影响肝癌细胞恶性生物学行为可能和活化MAPK信号通路有关。