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目的:研究免疫耐受期、抗病毒治疗和停药复发的慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中HBV特异性CD8+T细胞的水平及免疫功能,探讨停药复发患者短时间内出现严重肝损害的可能原因。方法:1.研究对象收集2014年5月至2014年12月就诊于南昌大学第一附属医院传染科的CHB患者111例,经HLA-A2组织分型得到HLA-A2+49例,分成三组:免疫耐受组15例,男11例,女4例,平均28.8±8.3岁,均为免疫耐受期患者(即ALT正常、HBe Ag阳性、HBV-DNA持续高水平、肝组织没有或仅有轻微炎症);抗病毒治疗组20例,男14例,女6例,平均41.0±14.3岁,为经过抗病毒治疗后HBV-DNA持续阴性6个月以上;停药复发组14例,男10例,女4例,平均44.9±11.2岁,为经过核苷(酸)类似物抗病毒治疗HBV-DNA转阴至少6个月以上而停药复发者。所有患者均符合2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》中确定的诊断标准;均排外合并药物、毒物、酒精、其他病毒、遗传代谢性疾病等所致肝损者。收集健康者25例,经分型得到HLA-A2+者8例,男5例,女3例,平均年龄35.9±9.2岁,作为阴性对照组;排除HAV、HBV、HCV、HDV、HEV及HIV等感染。2.实验方法收集受试者HBV-DNA、HBe Ag、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等临床指标。HBV-DNA的检测采用实时荧光定量PCR法,血清HBe Ag采用雅培Axsym全自动化学发光免疫分析仪检测,ALT采用日立7600型全自动生化分析检测;采用流式细胞术进行HLA-A2分型;采用MHC-五聚体流式细胞术检测HLA-A2阳性患者HBc Ag18-27特异性CD8+T细胞的数量;分离外周血单个核细胞(PBMC),采用ELISPOT检测HBV特异性CTL分泌IFN-γ、TNF-α等细胞因子功能。分析各组特异性T细胞数量及分泌功能之间的差异,及它们与HBV-DNA、HBe Ag之间的相关性。结果:(1)免疫耐受组患者HBV特异性CD8+T细胞数量及免疫功能明显低于抗病毒治疗组,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)在免疫耐受组患者,HBV特异性CD8+T细胞的数量与血清HBV-DNA滴度、HBe Ag之间呈明显的负相关(r=-0.882,P<0.001;r=-0.755,P=0.001),细胞因子分泌功能与HBV-DNA滴度、HBe Ag之间也呈明显负相关性(分泌IFN-γ:r=-0.837,P<0.001;r=-0.787,P<0.001;分泌TNF-α:r=-0.685,P=0.005;r=-0.671,P=0.006)。(3)在抗病毒治疗组患者,HBV特异性CD8+T细胞的数量增多,且随HBV-DNA阴转时间延长、HBe Ag水平的下降而增强,恢复峰值出现在HBV-DNA转阴1年左右,之后随阴转时间延长而表现出降低趋势,并维持在较低水平。(4)停药复发组患者HBV特异性CD8+T细胞数量及免疫功能均高于抗病毒治疗组(P<0.05)和免疫耐受组(P<0.01),差异有统计学意义。(5)三组患者HBV特异性CD8+T细胞的数量及免疫功能均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CHB患者HBV特异性CD8+T细胞的数量减少及免疫功能受损,可能与T细胞长期暴露在大量HBV抗原环境中导致T细胞耗竭有关;抗病毒治疗能使HBV特异性T细胞的水平及功能得到恢复,但一味的抗病毒治疗可能不利于机体特异性抗病毒免疫的维持;停药复发患者短时间内出现肝损害,并且肝损害往往较重,可能与HBV特异性T细胞功能恢复和记忆性T淋巴细胞受反弹的HBV的刺激短时间内产生大量效应性T淋巴细胞导致肝细胞大量损伤坏死有关。