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研究目的:研究II型cGMP依赖性蛋白激酶(Type II cGMP dependent protein kinase,PKG II)对人胃癌细胞血管内皮生长因子受体2(Vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)介导的主要信号转导通路及生物学效应的影响,探讨其相关的分子机制。研究方法:用编码PKG II cDNA的腺病毒(Ad-PKG II)感染胃癌细胞株HGC-27和AGS细胞,使其高表达PKG II,并用特异性激动剂8-pCPT-cGMP激活PKG II,用血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)激活VEGFR2,进行如下检测:采用Western Blot方法检测相关蛋白表达和磷酸化水平;采用MTT法、Transwell法、Annexin V-FITC/PI法和Matrigel血管生成实验分别检测细胞增殖、迁移、凋亡及新生血管形成;采用免疫共沉淀法检测PKG II与VEGFR2之间的相互作用;采用免疫沉淀法联合Western Blot法检测PKG II对VEGFR2丝/苏氨酸的磷酸化作用;采用位点突变法将VEGFR2的393位苏氨酸(Thr393)、439位苏氨酸(Thr439)和1231位丝氨酸(Ser1231)突变成丙氨酸,进而研究PKG II作用于VEGFR2的特异性磷酸化位点。研究结果:1.PKG II阻断VEGF-A引起的胃癌细胞VEGFR2酪氨酸磷酸化/活化,并抑制VEGF-A/VEGFR2介导的ERK1/2、MEK、Akt和mTOR的磷酸化/活化。2.PKG II抑制VEGF-A的促细胞增殖、迁移和血管生成作用及抗细胞凋亡作用。3.PKG II与VEGFR2相互结合,使其发生丝/苏氨酸磷酸化。4.PKG II磷酸化VEGFR2的Thr439和Ser1231位点,进而阻断VEGF-A对VEGFR2的激活。研究结论:PKG II通过结合VEGFR2并使其Thr439和Ser1231位点发生磷酸化,进而阻断VEGF-A对VEGFR2的激活,抑制VEGF-A/VEGFR2启动的信号转导,最终抑制VEGF-A/VEGFR2诱导的胃癌细胞的增殖和迁移;PKG II对VEGF-A/VEGFR2诱导的新生血管形成也有抑制作用,并拮抗VEGF-A/VEGFR2的抗凋亡效应。结果初步阐明PKG II为一有效的抗癌因子。