【摘 要】
：
目的:本研究旨在基于超滤质谱分析技术建立一种结合超滤和液质联用分析方法以筛选和鉴定当归四逆汤中潜在靶向凝血酶和基质金属蛋白酶-2的生物活性成分,为阐明当归四逆汤温经散寒、养血通脉的药效物质基础提供科学依据。方法:本课题采用液质联用技术对当归四逆汤复方中的成分进行表征,并应用酶活性测定结合超滤离心质谱分析技术对中药复方当归四逆汤中潜在的凝血酶抑制剂和基质金属蛋白酶-2抑制剂进行了分析,鉴定和验证。首
论文部分内容阅读
目的:本研究旨在基于超滤质谱分析技术建立一种结合超滤和液质联用分析方法以筛选和鉴定当归四逆汤中潜在靶向凝血酶和基质金属蛋白酶-2的生物活性成分,为阐明当归四逆汤温经散寒、养血通脉的药效物质基础提供科学依据。方法:本课题采用液质联用技术对当归四逆汤复方中的成分进行表征,并应用酶活性测定结合超滤离心质谱分析技术对中药复方当归四逆汤中潜在的凝血酶抑制剂和基质金属蛋白酶-2抑制剂进行了分析,鉴定和验证。首先对当归四逆汤水提液的酶抑制活性进行分析测定,其次采用超高效液质联用技术对筛选方法进行了条件优化,进而用优化的筛选方法对当归四逆汤的成分进行凝血酶和基质金属蛋白酶-2结合后的超滤筛选,并使用质谱碎片进行结构鉴定。最终使用分子对接实验验证其抑制凝血酶和基质金属蛋白酶-2的潜在活性位点。结果:本文共鉴定当归四逆汤中47个化学成分,为筛选潜在酶抑制剂提供物质基础。通过生色底物法和荧光底物法分别测定了当归四逆汤对凝血酶和基质金属蛋白酶-2的抑制活性,并计算出了当归四逆汤水提物对凝血酶的半数抑制率分别为0.12mg/m L和1.05 mg/m L。建立了当归四逆汤水提物超滤亲和抗凝血酶和基质金属蛋白酶-2的筛选方法。优化了筛选条件孵育时间,孵育温度,以及洗脱溶剂比例,最终确定凝血酶最佳孵化时间为30分钟、温度为30℃,洗脱溶剂为100%甲醇。确定基质金属蛋白酶-2最佳孵化时间为30分钟、温度为37℃,洗脱溶剂为75%甲醇。通过优化的筛选条件和超滤离心质谱技术从当归四逆汤中筛选出16种凝血酶抑制剂和出10种基质金属蛋白酶-2抑制剂。分子对接分别研究了凝血酶与当归四逆汤中潜在直接凝血酶抑制剂的结合方式,MMP-2与潜在MMP-2抑制剂的结合方式。结果表明在当归四逆汤水提物与酶的结合过程中,氢键和疏水作用起到了关键作用。结论:应用液质联用技术鉴定出当归四逆汤中47个化学成分:酸类及其苷类共8个,其中酚酸类5个,1个酸苷,2个有机酸;氨基酸类6个,嘌呤衍生物2个,黄酮类10个,单萜苷类7个,三萜皂苷类14个。通过生色底物法测定了当归四逆汤对凝血酶的半数抑制率为0.12 mg/m L。通过优化的筛选条件和超滤离心质谱技术从当归四逆汤中筛选出16种潜在凝血酶抑制剂,并发现在潜在凝血酶抑制剂与酶的结合过程中,氢键和疏水作用起到了关键作用。通过荧光底物法测定了当归四逆汤对质金属蛋白酶-2的半数抑制率为1.05 mg/m L。通过优化的筛选条件和超滤离心质谱技术从当归四逆汤中筛选出10种潜在基质金属蛋白酶-2抑制剂,并发现在潜在基质金属蛋白酶-2抑制剂与酶的结合过程中,氢键和疏水作用起到了关键作用。本文应用超滤离心质谱技术筛选当归四逆汤中的凝血酶和基质金属蛋白酶-2抑制剂,为基于靶点的天然药物的发现提供了有效的研究手段,为阐明当归四逆汤温经散寒、养血通脉的药效物质基础提供科学依据,为中药复方活性成分的快速发现和筛选进行有益的探索。
其他文献
目的:本研究旨在探讨重型β地中海贫血（β-Thalassemia major,β-TM）患儿造血干细胞移植（hematopoietic stem cell trans plantation,HSCT）前后铁过载（iron overload,IO）的变化,及去铁酮（deferiprone,DFP）祛铁治疗的有效性及安全性,为临床提供参考。方法:收集2014年1月至2019年12月在我院儿科诊治行HS
目的:经鼻蝶无功能性垂体腺瘤术后激素水平低下发生率较高,探讨术后激素水平低下的危险因素对降低术后激素水平低下的发生率具有重要临床意义。方法:回顾分析112例在广西医科大学第一附属医院2017年1月1日至2018年12月31日显微镜下经鼻蝶手术的无功能性垂体腺瘤患者的临床资料。运用SPSS19.0统计软件,采用卡方检验和logistic回归分析模型,对数据资料进行统计学分析,探讨性别、年龄、肿瘤体积
目的:分析早期三阴性乳腺癌保乳术和乳房切除术的患者预后,为早期三阴性乳腺癌的术式选择提供依据。方法:1、回顾性分析202例早期(T1-2N0-1M0)三阴性乳腺癌的临床病理资料,其中保乳术联合放疗90例,乳房切除术112例;保乳术组与乳房切除组的患者临床病理因素（年龄、月经状态、BMI、肿瘤大小、淋巴结转移、淋巴脉管癌栓、组织学分级及Ki-67等）的差异采用卡方检验。2、采用Log-rank单因素
目的:本研究旨在研究正常成人C5、C6、C7水平神经根横截面积（CSA）的超声测量值范围及其影响因素分析,同时分析正常成人与颈椎病神经根受压患者臂丛神经根CSA的差异及其对臂丛神经根受压的诊断意义。方法:（1）选取于2019年4月至2019年10月在广西医科大学第一附属医院行高频超声检查的100例健康志愿者作为正常对照组,使用高频超声于各个标志点对每位受检者的双侧C5、C6、C7水平神经根CSA进
目的:探究使用国产CalliSpheres载药栓塞微球行经肝动脉化疗栓塞术联合甲磺酸阿帕替尼治疗中晚期肝癌的疗效及安全性。方法:回顾性分析2017年01月至2018年01月在广西医科大学附属肿瘤医院介入治疗科收治的61例中晚期原发性肝癌患者,根据治疗方案分为A（实验组,30例）、B（对照组,31例）两组。其中实验组,采用CalliSpheres微球行经肝动脉化疗栓塞术,术后联合阿帕替尼治疗;对照组
目的本研究旨在通过制作铁超负荷动物模型,并应用MRI获取动物肝脏、脾脏、心肌、肾皮质的R2*值及信号强度比的自然对数来对比分析动物模型中,脾切除铁剂未减量组、脾切除铁剂减量组与脾未切除组内脏铁沉积的变化,从而更加科学、客观的论证脾切除对内脏铁超负荷的影响;将肝脏、脾脏、心肌、肾皮质的R2*值和信号强度比的自然对数与铁浓度之间进行相关性分析,探讨R2*值和信号强度比的自然对数对铁沉积定量诊断的价值。
目的:探讨常规磁共振征像联合磁敏感加权成像（Susceptibility weighted imaging,SWI）的Nomogram模型对腮腺良恶性病变的预测价值,以直观、简便、客观地对腮腺良恶性病变进行恶性风险率评估,提高临床对腮腺良恶性病变鉴别的诊断效率,为腮腺病变的术前诊断提供更多可靠的依据。方法:回顾性分析我院51例腮腺病变患者的临床和影像学资料,所有病例均经术后病理证实,其中良性病变2
目的:探讨3D打印技术辅助经腹膜后入路腹腔镜巨大肾上腺肿瘤切除术的临床应用价值。方法:从2016年1月至2019年8月,根据研究入选标准从广西医科大学第一附属医院收治的肾上腺肿瘤病人中,筛选巨大肾上腺肿瘤（直径≥6 cm）患者,最终共26例患者纳入研究。所有患者计划行经腹膜后入路腹腔镜巨大肾上腺肿瘤切除术。纳入研究中的患者按照随机分配原则分配到3D打印组和对照组。术前3D打印组患者接受肾上腺CT平
研究背景对于心房颤动（Atrial fibrillation,AF）合并冠心病（Coronary heart disease,CHD）的患者在经皮冠脉介入治疗（Percutaneous coronary intervention,PCI）后的抗凝策略的选择上仍存在争议。包括或不包括阿司匹林联合口服抗凝药（Oral anticoagulants,OAC）和P2Y12受体抑制剂的二联抗凝治疗（Dual
第一部分慢性阻塞性肺疾病患者自噬对组蛋白去乙酰化酶-2的影响目的:观察COPD患者外周血单个核细胞（PBMCs）的自噬情况,以及自噬对组蛋白去乙酰化酶-2（Histone Deacetylase 2,HDAC2）的影响。方法:选取非吸烟健康志愿者（HVs）、吸烟志愿者（SVs）、稳定期的慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者各8例,每个研究对象抽取外周静脉血15ml,采用泛影钠-不连续密度梯度离心法,在