稻稗对三种除草剂多重抗药性及其机制研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:owennb
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稻稗是我国东北地区水稻田常见的杂草之一,属农田恶性杂草,严重危害水稻产量和质量。五氟磺草胺(Penoxsulam)、噁唑酰草胺(Metamifop)和二氯喹啉酸(Quinclorac)是我国水稻田防治禾本科稗属杂草的特效药剂,前期对稻稗具有较好的防效,近年来防治效果明显下降。本研究以采自东北三省不同水稻主产区的32个稻稗种群为研究对象,采用整株生物测定法测定了不同种群对3种除草剂的多重抗药性,对筛选出的3个多重抗药性种群进行抗药性水平测定;并以3个疑似多重抗药性种群为试验材料,通过基因测序和离体酶活性测定的方法,研究了不同种群靶标基因序列及靶标酶活性差异;通过生理生化方法,研究了不同种群解毒酶β-CAS活性差异;以马拉硫磷为P450s抑制剂,测定了不同种群代谢酶P450s活性差异,以期完成我国东北地区稻稗抗药性的初步监测,从而为稻稗的科学防治提供初步理论依据。选用3种除草剂田间最高推荐剂量对稻稗种群进行单剂量筛选,发现32个稻稗种群中23个种群对五氟磺草胺产生了抗药性,17个种群对噁唑酰草胺产生了抗药性,9个种群对二氯喹啉酸产生了抗药性,抗药性发生率较高,抗药性种群数达26个,同时筛选到了HLJ4、LN1和LN24种群对3种除草剂产生了疑似多重抗药性。采用整株生测法,对3个疑似多重抗药性种群进行抗药性水平测定,结果表明HLJ4,LN24和LN1分别对五氟磺草胺产生了低中高三种水平的抗药性,抗药性指数分别为4.80、8.66和25.67;HLJ4和LN1种群对噁唑酰草胺产生了高水平抗药性,抗药性指数分别为10.64和23.59,LN24对噁唑酰草胺产生了中水平抗药性,抗药性指数为9.86;HLJ4种群对二氯喹啉酸产生了高水平抗药性,LN1和LN24种群对二氯喹啉酸产生了极高水平抗药性,抗药性指数分别为65.85、145.21和269.60。分别对疑似敏感性种群和疑似多重抗药性种群ALS和ACCase酶基因进行了扩增和克隆,经对比发现,3个疑似多重抗药性种群均未检测到靶标酶编码基因氨基酸突变。靶标酶ALS和ACCase离体活性测定结果表明,三个疑似多重抗药性稻稗种群ALS酶对五氟磺草胺的敏感性,以及ACCase酶对噁唑酰草胺的敏感性与疑似敏感性种群基本一致,抗药性指数为1.06-1.38。由此推断,3个种群对五氟磺草胺和噁唑酰草胺的多重抗药性,并非是靶标酶基因突变和靶标酶活性增强导致的。研究发现,在二氯喹啉酸施用后,不同种群β-CAS酶活性变化差异显著。疑似多重抗药性种群LN24体内β-CAS活性被诱导,活性始终高于同期对照,在7d时达到最高,为同期对照的1.72倍,疑似多重抗药性种群HLJ4和LN1活性为先小幅度下降后恢复至初始水平,而疑似敏感性种群β-CAS活性施药后无显著变化,直至死亡。由此推断,LN24种群对二氯喹啉酸的抗药性与β-CAS活性被诱导有关。以马拉硫磷为P450s抑制剂,研究了其对三个疑似多重抗药性种群抗药性水平的影响,研究结果表明,马拉硫磷可显著降低三个多重抗药性种群对五氟磺草胺的抗药性,马拉硫磷施用前后的抗药性指数比分别为1.99、5.42和1.60,LN1种群对噁唑酰草胺,以及HLJ4对二氯喹啉酸的抗药性水平也显著降低,马拉硫磷施用前后的抗药性指数比分别为5.21和6.37。由此推断,多重抗药性种群抗药性的产生与P450s活性有关。
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