淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae, NG)是泌尿生殖系统传播疾病(STD)最常见的病原体,发病率较高,如何快速、准确的进行检测,对诊断、治疗和控制淋球菌感染引起的疾病意义重大。目前诊断的金标准是培养方法,特异性和准确性都很高,但耗时较长,不易作出早期诊断。实时荧光定量 PCR 技术使 PCR 从常规定性检测迈上了可以进行量化的台阶,达到实时监测、绝对定量和快速检测的目的。现有的淋病奈瑟氏菌荧光定量 PCR 诊断试剂盒主要利用 Taqman 探针技术开发,探针合成以及其双标记价格昂贵,给病人带来了极大的经济压力。自身淬灭探针技术是 2002 年才研究开发出的一种新型荧光定量PCR 技术,它的主要特点是在保证高灵敏度和高特异性的前提下,能够极大的降低成本(仅为 Taqman 探针技术的 50%)。故我们考虑用该技术建立淋病奈瑟氏菌新型荧光定量 PCR 检测方法。 目的:拟利用自身淬灭探针技术建立一种能广泛应用于临床的快捷、敏感、特异、价格低廉和稳定性较好的新型淋病奈瑟氏菌实时荧光定量 PCR 检测方法。 方法:采用基因克隆技术,将淋病奈瑟氏菌 CPPB 基因片段插入到载体 pGEM-11Zf 中,获得含有 CPPB 基因片段的克隆质粒,以此作为标准品。根据淋病奈瑟氏菌隐蔽质粒 CPPB 的编码基因序列设计合成自身淬灭引物,优化 PCR 条件,建立以自身淬灭引物技术为平台的实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,并对所建立的方法进行方法学评价。最后用该方法对临床收集的疑为淋病奈瑟氏菌感染的患者标本进行检测并和培养方法进行比较。 结果:1) 成功构建了重组质