【摘 要】
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目的:（1）观察外周血间充质干细胞（PB-MSCs）局部移植对脊髓损伤（SCI）组织巨噬细胞表型的调节作用;（2）观察PB-MSCs移植对SCI大鼠体内局部组织微环境的影响。方法:采用密度梯度离心法对经G-CSF动员的大鼠外周血进行PB-MSCs分离、培养,显微镜形态观察与流式细胞术鉴定PB-MSCs。采用重物坠落打击法制备大鼠SCI模型,实验分为Sham组、SCI组、PBS组与PB-MSCs组,
【基金项目】
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国家自然科学基金:PB-MSCs通过STAT3介导的IL-10信号调控M2巨噬细胞极化的机制研究（81960299）； 贵州省自然科学基金:PB-MSCs移植调节脊髓损伤组织巨噬细胞极化的能力与分子机制研究（黔科合基础[2020]1Y324）；
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目的:（1）观察外周血间充质干细胞（PB-MSCs）局部移植对脊髓损伤（SCI）组织巨噬细胞表型的调节作用;（2）观察PB-MSCs移植对SCI大鼠体内局部组织微环境的影响。方法:采用密度梯度离心法对经G-CSF动员的大鼠外周血进行PB-MSCs分离、培养,显微镜形态观察与流式细胞术鉴定PB-MSCs。采用重物坠落打击法制备大鼠SCI模型,实验分为Sham组、SCI组、PBS组与PB-MSCs组,造模成功1 w后分别对PBS组、PB-MSCs组使用明胶海绵吸附PBS、PB-MSCs（每只大鼠移植细胞总数为5?105个）进行局部移植。移植后的3 d、1 w、2 w、4 w、8 w随机采样进行如下检测:（1）观察脊髓大体形态;（2）斜板实验、BBB评分对大鼠进行行为学检测;（3）脊髓组织HE染色病理学检查;（4）流式细胞术检测受损脊髓组织巨噬细胞表型及所占比例;（5）PCR检测脊髓组织中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β1的表达;（6）ELISA检测大鼠血清中IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β1水平。结果:（1）采集制备的PB-MSCs呈梭形贴壁生长,形态均一;流式细胞术检测其高表达CD29、CD44和CD90,不表达CD11b、CD45与CD79;（2）观察脊髓大体外观发现:PB-MSCs移植可减轻大鼠脊髓血肿程度;PB-MSCs组SCI部位质地较韧,而SCI组与PBS组损伤部位组织疏松且4 w、8 w时组织有明显萎缩;（3）斜板实验与BBB评分进行行为学检测显示:SCI组、PBS组与PB-MSCs组的斜板实验及BBB评分随时间呈逐渐升高的趋势,但PB-MSCs组在移植后1 w起得分均明显高于SCI组与PBS组;（4）HE染色的病理切片显示:SCI组和PBS组在3 d、1 w有红细胞及大量炎性细胞浸润,而PB-MSCs组炎症浸润程度则明显减轻;PB-MSCs组在2 w、4 w、8 w时空洞形成范围亦小于SCI组、PBS组;（5）流式细胞术检测脊髓组织中M1型巨噬细胞免疫表型（CD11b+CD86+双阳性细胞）与M2型巨噬细胞免疫表型（CD11b+CD206+双阳性细胞）,发现PB-MSCs的移植可以明显增加各时间点M2型巨噬细胞的比例,减少M1型巨噬细胞数量;（6）PCR检测:PB-MSCs组各时间点的IL-6、TNF-α表达均较同一时间点的SCI组、PBS组减弱,同时IL-10、TGF-β1的表达则明显升高;（7）ELISA检测:PB-MSCs组大鼠血清中IL-6、TNF-α的含量在2 w、4 w、8 w均明显低于同一时间点的SCI组,并且从1 w起开始明显低于PBS组;各组大鼠血清中IL-10、TGF-β1的表达呈逐渐上升的趋势,但PB-MSCs组IL-10的表达自1 w起高于SCI组与PBS组,且TGF-β1的表达在5个时间点均高于SCI组与PBS组。结论:（1）PB-MSCs移植治疗SCI后在早期即可调节巨噬细胞表型向M2型极化,明显增加损伤部位M2型巨噬细胞比例,减轻SCI早期的继发性损害;（2）PB-MSCs移植可以减少促炎因子IL-6、TNF-α的分泌和表达,提高抗炎因子IL-10、TGF-β1的水平,一方面改善了损伤部位的修复环境,另一方面也可以继续影响巨噬细胞向抗炎型方向转化。
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