枸杞叶主要酚类成分和生物活性的综合评价及其高效提取富集工艺

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本研究选用重要的森林资源“宁杞1号”、“黑果枸杞”、“宁杞菜1号”三个品种的梢部嫩叶与基部老叶六种枸杞叶为材料,建立了一种能够快速检测枸杞叶中5个酚类化合物的方法;对比了六种枸杞叶中一些化学成分含量及其活性的差异,分析了活性和成分之间的相关关系;最后建立了一种绿色高效简便的提取方法,用于提取枸杞叶中的5种酚类化合物。本文主要研究结果如下:(1)建立了一种能够高效检测枸杞叶中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷五种酚类化合物的高效液相色谱方法:色谱柱:Phenomenex Luna PFP(4.6 mm×250mm,5μm)柱,柱温40℃;流动相:A(0.1%的甲酸水)-B(乙腈);梯度洗脱:0-10 min,10-10%B;10-15 min,10-16%B;15-30 min,16-18%B;30-40min,18-18%B;40-45 min,18-30%B。检测波长:350nm,流速:1 m L/min,进样量20μL。该方法呈现良好的线性关系(R~2>0.99),且重现性、精密度、稳定性及加样回收率都较高。(2)枸杞叶中总酚、总黄酮和5种酚类化合物总含量及DPPH抗氧化能力,均有梢部叶大于基部叶的状况,且都是“宁杞菜1号”梢部叶的含量最多(抗氧化能力最高)。通过体外抑菌试验发现枸杞叶提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌能力显著,且抑菌能力最强的是“宁杞菜1号”梢部叶。通过相关性分析推断,枸杞叶的抗氧化能力可能受芦丁影响,其抑菌能力可能受绿原酸、隐绿原酸、芦丁影响。(3)以“宁杞菜1号”梢部叶为原料,研究了使用绿色超分子溶剂提取枸杞叶种5个酚类化合物的最佳提取工艺条件。通过单因素试验结合响应面分析确定了最佳提取工艺为:提取溶剂:5%辛酸-24%乙醇-71%水合成的的100%超分子溶剂,固液比:22 mg/m L,涡旋时间:6分钟,涡旋转速:100%。该参数条件下的提取率(mg/g)为:新绿原酸,0.381;绿原酸,7.939;隐绿原酸,6.734;芦丁,8.944;山奈酚-3-O-芸香糖苷,6.734。本文建立的高效液相色谱检测方法、不同枸杞叶品种间化学成分和生物活性的综合分析以及枸杞叶功能成分的绿色高效提取技术可以为枸杞叶质量分析方法提供科学参考,同时也为枸杞副产物(枸杞叶)高质化加工和利用提供了新原料来源。所优化的超分子溶剂提取技术溶剂天然绿色、消耗量小,提取技术高效简便,为超分子溶剂用于植物有效化学成分的技术开发奠定了基础,也为枸杞叶的加工利用提供了新的参考途径。
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