甜瓜蔓枯病抗性生理特点及抗性基因的分子标记研究

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甜瓜(Cucumis melo L.)属于葫芦科(Cucurbitaceae)甜瓜属(Cucumis),是人们喜爱的水果之一,目前中国甜瓜的产量和消费量均居世界前列。甜瓜蔓枯病是一种由Didymella bryoniae引起的土传真菌病害,其发生常导致甜瓜产量和品质上的严重损失,目前国内外甜瓜品种的蔓枯病抗性主要由Gsb-1提供,对蔓枯病Didymella bryoniae的抗性不足。提供甜瓜持久稳定的抗性,创制培育复合抗源已成为必然。抗性基因Gsb-4抗性供相对稳定、持久。因此,围绕如何利用Gsb-4抗性基因来提高甜瓜蔓枯病抗性开展了课题,本研究明确了甜瓜资源接种蔓枯病菌后的生理生化变化特点,以期在一定程度上揭示甜瓜蔓枯病的抗性形成机制,并为甜瓜蔓枯病抗性育种的种质资源鉴定提供技术借鉴;在此基础上,筛选甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb-4的SSR标记,并将其转化为可以便捷利用的SCAR标记,为甜瓜蔓枯病抗性基因的分子标记辅助育种奠定了一定的基础。具体研究如下:1.不同抗性甜瓜接种蔓枯病菌后若干生理指标的变化以高抗蔓枯病的自交系PI420145和感蔓枯病的自交系伊丽莎白为材料,三叶一心期进行蔓枯病接种,接种一周后对抗感材料叶片叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白及3种防御酶(PPO、POD、PAL)的活性等指标进行测定。结果表明:抗感材料的叶绿素含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量的高低与蔓枯病抗性的强弱没有必然的联系,PPO、POD和PAL对蔓枯病原菌的侵染具有积极的作用,根据其接种蔓枯病菌后的变化规律,可以为甜瓜蔓枯病的接种鉴定提供参考价值。2.甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-4分子标记以含有抗病基因Gsb-4的甜瓜抗蔓枯病材料PI482398和感病材料白皮脆,及以此为亲本构建的118株F2群体为材料,通过89对SSR多态性引物的筛选,并利用MAPMAKER/Exp version3.0b软件分析,获得了与抗蔓枯病基因Gsb-4连锁的SSR标记CMAT170a,连锁距离为5.14cM。研究结果表明该标记可用于甜瓜抗蔓枯病分子标记辅助育种和抗病基因聚合育种。3.甜瓜抗蔓枯病基因SCAR标记的转化与验证在获得与GSb-4连锁的SSR标记的基础上,将SSR特异片段回收、测序,根据序列片段设计特异引物SCARGB1,将该特异引物在PI482398和白皮脆杂交的F2群体的118单株上进行验证,特异扩增检测F2群体分离结果(抗:感=3:1)与原先的SSR标记检测结果完全一致,表明SSR标记已经成功转化为SCAR标记,该SCARGB1标记与Gsb-4基因连锁距离为5.14cM。
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