目的研究糖基化低密度脂蛋白(glycosylated low density lipoprotein,G-LDL)对巨噬源性泡沫细胞形成和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)-C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)介导的巨噬细胞凋亡途径的调控作用,以进一步探讨糖尿病性动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发展的分子机制,为进一步阐明AS发病机制提供新的理论依据。方法1、G-LDL的制备及其糖基化水平的测定:收集健康人血浆,采用序列超速离心法分离血浆LDL,与250 mmol/L D-葡萄糖37°C避光无菌条件下孵育7天。ELISA法检测脂蛋白中羧甲基赖氨酸(carboxymethyl-lysine,CML)含量,测定糖基化水平。2、体外培养RAW264.7巨噬细胞,正常健康人LDL作为阴性对照,衣霉素(tunicamycin,TM)作为阳性对照,随机分为(1)正常对照(control)组:常规培养;(2)LDL组:细胞培养液中加入100 mg/L LDL;(3)G-LDL组:培养液中加入不同浓度(25、50、100、200 mg/L)G-LDL;(4)TM组:培养液中加入TM(4 mg/L);(5)内质网应激抑制剂4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA)+G-LDL组:先用PBA(5mmol/L)预处理细胞30 min,再加入100 mg/L G-LDL于细胞培养液中。各组细胞处理后继续培养24h。MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法分别检测G-LDL对巨噬细胞活力及凋亡的影响;油红O、尼罗红染色检测细胞内脂质蓄积情况;免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光定量PCR(Real-Time-PCR)技术分别检测内质网应激促凋亡因子CHOP蛋白和m RNA表达水平。结果与正常健康人LDL组相比,G-LDL组中CML水平明显增高(P<0.01)。与正常对照组相比,G-LDL组对巨噬细胞的损伤随浓度增加而加大,表现为细胞活力明显下降(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01),细胞内胆固醇蓄积增多(P<0.01)。Western blot和PCR结果均显示G-LDL明显上调CHOP蛋白及m RNA表达水平,且呈浓度依赖性(P<0.05或P<0.01),其上述作用与ERS诱导剂TM相似。此外,与G-LDL处理组相比,PBA预处理组细胞损伤明显降低(P<0.05),细胞总凋亡率也显著性下降(P<0.01),细胞内CHOP蛋白及m RNA表达水平也明显下调(P<0.05)。结论糖基化低密度脂蛋白能诱导RAW264.7巨噬源性泡沫细胞形成和凋亡,且CHOP介导的ERS凋亡途径可能是其导致巨噬细胞凋亡的重要机制。