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目的:趋化因子作为细胞因子,在疼痛调节中发挥重要作用,目前趋化因子参与针刺镇痛的研究较少。本课题组前期研究已经发现针刺上调血清和脊髓中趋化因子CXCL1参与镇痛作用,但未涉及其他趋化因子。本研究在前期研究基础上,采用针刺足三里对CFA炎性痛小鼠镇痛有效的平台,对脊髓、血清和足垫部位趋化因子进行筛选,明确针刺对不同部位趋化因子的作用,筛选出参与针刺镇痛的趋化因子及部位,并初步探索其作用机制。方法:首先采用50μl CFA右侧足底皮下注射诱导的佐剂性关节炎小鼠炎性痛模型,针刺双侧足三里穴,于造模前后及1-7天针刺后测量热辐射痛及机械痛,针刺第7天后取材脊髓,ELISA检测PGE2,确立针刺对CFA小鼠的镇痛效应。在针刺镇痛有效的基础上,采用液相芯片技术检测脊髓、血清和足垫部位趋化因子CCL2、CCL7、CXCL12、CXCL13、CX3CL1蛋白含量,采用ELISA技术检测血清中CXCL2蛋白含量,RT-q PCR技术检测脊髓部位上述趋化因子及受体表达量,筛选出可能参与针刺镇痛的趋化因子及作用部位,中和筛选出的脊髓目标趋化因子CCL7,观察其对针刺镇痛效应的影响。在明确脊髓CCL7介导针刺镇痛作用的前提下,进一步研究其镇痛机制,采用RT-q PCR方法对比检测针刺7天状态下和鞘内注射CCL7中和抗体状态下,脊髓中多巴胺能神经元标记物酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,Th）以及多巴胺D2受体m RNA表达量;免疫组化方法观察脊髓中CCR2（趋化因子CCL7的受体）、Th蛋白在神经元上表达情况。结果:1.针刺可减轻CFA小鼠炎性痛:痛阈测量结果显示:造模前,机械痛与热痛阈值各组基础值没有差异（P>0.05）;造模后,与盐水组相比,模型组与针刺组小鼠足底热辐射痛阈值以及机械痛阈值均降低（P<0.01）;与模型组相比,针刺组痛阈值升高,从第1天起效（P<0.01）,一直持续到第7天（P<0.01）。ELISA结果显示:与盐水组相比,模型组PGE2显著升高（P<0.01）,针刺组PGE2无明显变化（P>0.05）;与模型组相比,针刺组降低（P<0.05）。2.液相芯片结果发现,针刺可上调脊髓组织中CCL7、CXCL2,上调血清中CXCL2、CXCL12,对足垫中趋化因子均有下调趋势。RT-q PCR结果发现针刺可上调脊髓中CCL2、CCL7、CXCL13 m RNA表达量,筛选出脊髓趋化因子CCL7为针刺变化明显趋化因子。液相芯片检测结果显示,在脊髓:与盐水组相比,模型组CX3CL1升高（P<0.05）,其余因子未见明显变化,针刺组CCL7（P<0.01）、CXCL2（P<0.05）升高;与模型组相比,针刺组CCL7（P<0.01）、CXCL2（P<0.05）升高、CX3CL1有降低趋势（P=0.054）。在血清:与盐水组比,模型组CCL2、CCL7、CXCL2升高,差异有统计学意义（P<0.05）,针刺组CCL2、CCL7、CXCL2、CXCL12升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比,针刺组CCL2、CCL7有下降趋势,但未见统计学差异（P>0.05）,针刺组CXCL2、CXCL12升高（P<0.05）;其余趋化因子无明显变化。在足垫:与模型组比,针刺组CCL2下降（P<0.05）、CCL7、CXCL12、CXCL13、CX3CL1有下降趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。RT-q PCR检测脊髓中趋化因子及其受体,结果显示,与盐水组相比,模型组CXCL12、CXCR4 m RNA表达量升高（P<0.05）,针刺组CCL7（P<0.01）、CXCL13（P<0.01）、CCL2（P<0.05）、CXCL12（P<0.05）、CXCR4（P<0.05）m RNA表达量升高;与模型组相比,针刺组CCL2、CCL7、CXCL13 m RNA表达量显著升高（P<0.01）;其余因子未见统计学差异（P>0.05）。3.中和脊髓CCL7可拮抗针刺镇痛效应,脊髓CCL7参与针刺镇痛:中和实验结果显示:针刺第1天,与模型+PBS组相比,针刺+PBS组痛阈升高（P<0.05）,针刺+低剂量中和剂组、针刺+高剂量中和剂组痛阈值无统计学差异（P>0.05）;与针刺+PBS组相比,针刺+1μg中和抗体组痛阈值降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,针刺+4μg中和抗体组痛阈值有下降趋势,但未见统计学差异（P>0.05）;与针刺+1μg中和抗体组比,针刺+4μg中和抗体组痛阈值无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）。针刺上调脊髓中Th m RNA表达量,对Drd2 m RNA表达量有上调趋势,中和脊髓CCL7可下调脊髓Th m RNA表达量,免疫组化结果显示脊髓Th、CCR2在神经元表达。针刺7天RT-q PCR实验结果显示:与盐水组相比,模型组Th m RNA表达量有下降趋势（P>0.05）、Drd2 m RNA表达量有下降趋势（P>0.05）,针刺组Drd2 m RNA表达量上调（P<0.05）、Th m RNA无明显变化（P>0.05）;与模型组相比,针刺组Th m RNA表达量上调（P<0.05）、Drd2 m RNA表达量有上升趋势（P>0.05）。中和脊髓CCL7后RT-q PCR结果显示:与模型+PBS组相比,针刺+PBS组Th m RNA表达量上调（P<0.05）,针刺+4μg中和抗体组表达量下调（P<0.05）;与针刺+PBS组相比,针刺+1μg中和抗体组、针刺+4μg中和抗体组Th m RNA表达量下调（P<0.05）。RT-q PCR结果显示,各组间Drd2m RNA表达量比较均无明显变化,无统计学差异（P>0.05）。免疫组化结果显示CCR2阳性表达细胞与神经元相似。结论:1.针刺双侧足三里可改善CFA模型小鼠炎性痛。2.针刺可影响多部位趋化因子参与针刺镇痛。在足垫,针刺降低促炎的趋化因子CCL2、CCL7、CXCL12、CXCL13、CX3CL1;在血清,针刺降低促炎趋化因子CCL2,升高镇痛趋化因子CXCL2;在脊髓,针刺升高脊髓中趋化因子CCL7、CXCL2,降低致痛趋化因子CX3CL1的表达。3.脊髓中CCL7参与针刺镇痛;初步表明脊髓部位CCL7镇痛机制可能与Th有关,仍需进一步研究。