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槲皮素是植物界分布最广泛的生物类黄酮化合物,具有扩血管、降血压、抗肿瘤、抗炎、抗过敏等多种生物学活性。近年来关于槲皮素的研究多集中在抗肿瘤、降血压等方面,而对其抗炎机理的研究较少。炎症是机体消灭入侵病原体和异物的防御反应,是十分常见而又重要的基本病理过程,但当炎症反应过度而失控时,将导致严重的后果。中性粒细胞(PMN)是机体最主要的炎性细胞,在炎症反应中居于核心地位,所以槲皮素的抗炎作用应该与其相关。PMN是终末分化细胞,寿命短暂,从分化成熟开始,就启动它的自发性凋亡程序,这种机制是避免炎症反应扩大化,减少自身组织损伤的最佳方式。但一些因素(如细菌脂多糖LPS)可以通过影响PMN自发性凋亡来延长或缩短PMN的功能性生命期限,从而对炎症的发展和转归产生重要影响。最近的研究表明,槲皮素既可诱导多种肿瘤细胞凋亡,又可以阻止一些非肿瘤细胞凋亡的发生。因此槲皮素有可能通过影响PMN自发性凋亡的进程来发挥其抗炎作用。本文拟研究在有或无LPS的情况下,槲皮素对PMN自发性凋亡的影响,旨在探讨槲皮素的抗炎作用机理。
本实验以体外培养的健康人的PMN为研究对象,在有或无LPS(1μg/mL)存在的情况下,槲皮素(1~100μmol/L)分别作用PMN12h、24h、36h、48h,通过光镜(怀特-姬姆萨染色法)和流式细胞术(碘化丙啶,PI单染法)对不同培养时间的细胞凋亡率进行检测,并对裂解的片段化DNA进行定量(二苯胺测定法)和定性(琼脂糖凝胶电泳)分析,同时还应用MTT法对不同状态下的PMN活性进行了测定。
实验结果显示:槲皮素(1~100μmol/L)对体外培养PMN的自发性凋亡率及细胞活性均无影响;LPS明显减小了PMN自发性凋亡率,并增加了PMN的细胞活性;而槲皮素抑制了LPS的这些效应,并且当浓度为40μmol/L时,槲皮素的抑制作用达到最大。
实验结果揭示:槲皮素对PMN自发性凋亡并无影响,而是抑制了LPS延迟PMN自发性凋亡的效应。这项研究结果无疑丰富了槲皮素的抗炎作用机理,为槲皮素的研究开辟了崭新的领域,对于脓毒症、急性呼吸窘迫综合症等炎症相关性疾病的临床治疗提供了一条新的思路,为进一步开发利用槲皮素这一天然植物药提取物奠定了理论和实验基础。