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分别于2005年、2006年不同季节对湛江市霞山区、湖光镇、东海岛和南山村等地区多个富贵竹加工厂进行调查,结果显示富贵竹(Dracaena Sanderiana)采后的主要病害包括由黑曲霉(Aspergillus,niger V. Tiegh.)引起的黑腐病、尖镰孢霉(Fusarium oxysporum Schlecht)引起的茎腐病、丛刺盘孢菌(Vermiculariasp.)引起的炭疽病和紫变青霉(Penicillium purpurogenum)为主引起的青霉病。其中黑腐病在工厂中检出率高,工厂间的分离率可达87.5%,大田中也可发病,在货柜贮运过程中危害严重,本文将其作为生防对象进行研究。
通过对富贵竹表面微生物的分离筛选,共得到对黑曲霉有拮抗作用的细菌约80株,其中革兰氏阳性杆菌FEa1、FB61、FF6平板抑菌活性明显,平板对峙试验中平均抑菌带宽分别为8.0mm、7.83mm、7.67mm。菌株FEa1对尖镰孢霉的平均抑菌带宽为6.0mm。采用Biolog微生物自动鉴定系统对三株细菌进行菌种鉴定。
地衣芽孢杆菌FEa1(Bacillus licheniformis)不仅对黑曲霉具有良好拮抗效果,同时对尖镰孢霉也有抑菌作用,经多代培养其对黑曲霉的抑菌带宽稳定在8mm左右,具有一定的生防开发前景。
平板对峙试验中FEa1主要通过分泌抑菌物质在培养基中扩散从而抑制病菌菌落生长,使抑菌带边缘黑曲霉菌丝生长畸形、分枝多且杂乱、原生质浓缩、菌丝内部产生大量泡囊状物并在菌丝表面产生凸起以及菌丝顶端胞内物质渗漏,同时能抑制病菌孢子的萌发。拮抗菌发酵液无菌滤液对黑曲霉菌丝生长及孢子萌发具有同样的抑制效果。实验结果表明,该菌不产生几丁质酶,而以产生一类耐高温高压、对pH6~9酸碱稳定性的物质为主要抑菌物质,该物质在pH5以下即可沉淀析出,其双缩脲反应呈阳性,推测可能为多肽类物质。
拮抗菌FEa1发酵液抑菌活性随发酵时间变化的初步研究表明,该菌在20ml/50ml发酵培养基、150rpm、28℃条件下84h~96h为较好的抑菌活性发酵时间。
采用竹条打孔法、竹块法等对各拮抗菌发酵液进行室内防效测定,结果显示各拮抗菌株在竹块上及竹条孔口处对黑曲霉的防效不理想,且对富贵竹组织造成危害,并加速黑曲霉的生长及富贵竹组织的腐烂。这可能与拮抗菌自身的营养代谢及菌体繁殖有关,因此采用拮抗菌活体发酵液不适合用于富贵竹竹条产品病害的防治。室内模拟工厂、贮运集装箱条件下采用FEa1发酵液无菌滤液防治试验显示具有一定的防治效果,其抑菌产物具有一定的开发应用前景。FEa1发酵液无菌滤液在28.9℃±1℃(湛江市平均最高气温),13h光照条件下第3、6、10天防效分别为95.4%、62.6%、63.7%,模拟贮运集装箱15.5℃±1℃黑暗条件下,第3、6、10天防效分别为100%、60.3%、58.1%。29℃第10天各处理仅在切口面产生不同程度的红色、水渍斑或稀疏菌丝体,发病对照则已严重腐烂并产生大量黑色分生孢子。FEa1发酵液无菌滤液与药剂(0.3ml/L爱多收+0.8g/L瑞毒霉锰锌)混剂以及三株拮抗菌的混合发酵液无菌滤液均无增效作用。两个温度条件下各处理第10天的防治效果均不如药剂对照,抑菌物质的提纯以及防效提高有待进一步研究。